細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

大鼠子宮組織提取物【Uterus: Normal Rat Uterus Derivatives】
產(chǎn)品描述：子宮是雌性生殖器官的一部分，是動(dòng)物胎兒或幼體發(fā)育生長(zhǎng)的場(chǎng)所，位于骨盆腔中央，在膀胱與直腸之間。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠子宮組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。        

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。   

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。       

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜

注意事項(xiàng)：
1. 接收到大鼠子宮組織提取物，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
產(chǎn)品僅供科研使用5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
TM4(正常小鼠Sertoli細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2貝美格（標(biāo)準(zhǔn)品）3-ETHYL-3-METHYLGLUTARIMIDE質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

Hs 746T(人胃癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 COS-7L, 非洲綠猴腎成纖維細(xì)胞 腺病毒轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞;AAV-293地喹氯銨（標(biāo)準(zhǔn)品）Dequalinium chloride質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

人干細(xì)胞因子單克隆抗體細(xì)胞株;AMS2(SCF3)硫酸氫小檗堿（標(biāo)準(zhǔn)品）BERBERINE ACID SULFATE質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

CD6 Others Rat 大鼠 CD6 / TP120 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 度米芬（標(biāo)準(zhǔn)品）Domiphen bromide質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測(cè)定

CM-H026人內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL醋酸優(yōu)力司特；醋酸烏利司他Ulipristal acetate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
人間充質(zhì)干細(xì)胞-臍帶 Human鹽酸文拉法辛（標(biāo)準(zhǔn)品）Venlaine hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

TPST1 Others Human 人 TPST1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 鹽酸文拉法辛Venlaine hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

雜交瘤(B類);IB3C10H12A12G2H8F3原卟啉IXProtoporphyrin IX質(zhì)量規(guī)格：>95%

BST2 Others Human 人 TETHERIN / BST2 / CD317 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 甲磺酸羅哌卡因（標(biāo)準(zhǔn)品）Ropivacaine mesylate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

原代上皮細(xì)胞特制無血清添加劑Many types of cells包裝：1ml甲磺酸羅哌卡因Ropivacaine mesylate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
大鼠子宮組織提取物SERPINB12 Others Mouse 小鼠 SerpinB12 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) LACTOSEMONOHYDRATE乳糖單水合物美國(guó)國(guó)家處方級(jí),ACS級(jí),英國(guó)藥典,歐洲藥典級(jí),日本藥典級(jí)白色至米白色粉末RTsigma

人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞;HEC-1-B3-羌基聯(lián)本;間本基酚 3-xy7noxybiphqnyl;3-Phqnylphqnol;3-xy7noxydiphqnyl;M-xy7noxybiphqnyl 280-21-8

SiHa細(xì)胞，子細(xì)胞 人鼻咽癌母系細(xì)胞,CNE-2Z細(xì)胞 CL-0240V79(倉(cāng)鼠肺細(xì)胞)5×106cells/瓶×25MGPNPPSUBSTRATETAETSPNPP試劑級(jí)淺黃色COLDsigma

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-p7CBZ-D-Valine芐氧羰基-D-纈酸10克BR，99%

FIGF Others Human 人 VEGF-D / VEGFD / FIGF 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (L-蘇酸)