概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。PCR實驗方法步驟：

PCR實驗方法步驟：

鮑氏不動桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

注意事項：

1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實驗，進(jìn)行實驗結(jié)果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

 英文名稱humancytochromop450elisakit人細(xì)胞色素p450規(guī)格：96t/48t

化化素高氯酸鹽 hplc≥98% 20mg 大量蛋白樣品樹脂法去內(nèi)試劑盒5

化鴉膽子素d hplc≥98% 20mg ratierleukin27,il-27elisa試劑盒大鼠白介素27(il-27)elisa試劑盒規(guī)格：96t/48t

化鴨腳樹葉堿 hplc≥98% 5mg 小鼠胰島細(xì)胞抗體(ica)elisa試劑盒 ，英文名： ica elisa kit

化雅姆皂苷元 hplc≥98% 10mg 小鼠游離脂肪酸(ffa)elisa檢測試劑盒mousefreefattyacids,ffaelisakit 96t/48t

化亞苯化基脲 hplc≥98% 20mg 人間α-胰蛋白酶抑制因子重鏈h1(itih1)試劑盒 human itih1 elisa kit

化亞麻木酚素 hplc≥98% 20mg rataquaporin1,aqp-1elisakit大鼠水通道蛋白1(aqp-1)elisa試劑盒規(guī)格：96t/48t

化亞麻酸化 gc≥98% 20mg 組蛋白h3-t110酸化檢測試劑盒10/20等

化亞油酸 gc≥98% 0.2ml mouseai-smoothmuscleaibody,asmaelisa試劑盒小鼠抗平滑肌抗體(asma)elisa試劑盒規(guī)格：96t/48t

化亞油酸化 gc≥98% 100mg 小鼠胰島素自身抗體(iaa)elisa試劑盒 ，英文名： iaa elisa kit

化維生素b hplc≥99% 20mg 小鼠血小板膜糖蛋白ⅱbⅲa(gp-ⅱbⅲa/cd41+cd61)elisa檢測試劑盒鮑氏不動桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒mouseplateletmembraneglycoproteinⅱbⅲa,gp-ⅱbⅲaelisakit 96t/48t

化煙酰胺 hplc≥99.5% 50mg 人間-alpha-胰蛋白酶抑制劑重鏈h4(itih4/ihrp/itihl1/pk120/pro1851)試劑盒 human itih4 elisa kit

化延胡索甲素 hplc≥98% 5mg