凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。產(chǎn)品僅供科研使用

參數(shù)規(guī)格：
人體膀胱癌組織源細(xì)胞【Cancer: Human Bladder Cancer Derivatives】
產(chǎn)品描述：膀胱癌是發(fā)生于膀胱的癌病類疾病，泛指各種出自膀胱的惡性腫瘤，最常見的膀胱癌細(xì)胞來自膀胱內(nèi)面黏膜表皮，是一種移行上皮細(xì)胞，貼壁生長，具有無限增殖能力，喪失接觸抑制現(xiàn)象，癌細(xì)胞間粘著性減弱。公司科技提供來自新鮮或冷凍人體膀胱癌組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明 ：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
培養(yǎng)操作:
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。產(chǎn)品僅供科研使用
大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL丙硫異煙胺質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BRProthionamide

BV-2小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞 Microglial cells of BV-2 mice 1640+20%FBS丙硫異煙胺(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Prothionamide

EREG Protein Human 重組人 Epiregulin / EREG 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)硬脂酸甲酯(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì))質(zhì)量規(guī)格：>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)Methyl Stearate

VE(人血管內(nèi)皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 胰島β細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)亞麻酸甲酯(>98.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)Methyl Linolenate

大鼠嗜堿性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞;RBL-2H3亞油酸甲酯(>99.0%(GC)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì))質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(GC)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)Methyl Linoleate
小鼠單核巨噬細(xì)胞;J774A.1氯化鍶六水Strontium chloride, hexhydrate質(zhì)量規(guī)格：AR,≥99%

tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細(xì)胞(B類);F9-CAG-tTA-1A3 IV型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL硫酸鈣二水Calcium sulfate, dihydrate質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR

AGS人胃腺癌細(xì)胞 Human2'-脫氧胞苷'-5'-1酸(dCMP)dCMP, 2'-Deoxycytidine 5'-monophosphate, free acid質(zhì)量規(guī)格：>98%,分子生物學(xué)級(jí)

TNFRSF1B Others Mouse 小鼠 TNFRSF1B / TNFR2 / CD120b 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) DSS(分子生物學(xué)級(jí))DSS質(zhì)量規(guī)格：分子生物學(xué)級(jí)

人心臟成纖維細(xì)胞-心房HCF-aa腺苷脫氨酶(15U/mg)Adenosine deaminase from calf spleen 15U/mg質(zhì)量規(guī)格：15U/mg,進(jìn)口
人體膀胱癌組織源細(xì)胞HAVCR1 Others Rat 大鼠 KIM1 / TIM1 / HAVCR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 沙堡氏(4%度)葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基100克

CM-M087小鼠軟骨細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL海藻酸 Alginic acid from brown algae 9005-32-7 50G 通用試劑

IL2RB Others Mouse 小鼠 CD122 / IL2RB / IL2 Receptor beta 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 靛藍(lán)胭脂紅;;;醋性靛藍(lán);可溶靛;靛卡紅 Indigotindisulfonctq wo7ium;Indigotinq;ccid bluq 74;Solublq indigo bluq;Indigo solublq;CcrMinq bluq;Indigo ccrMinq wo7ium sclt;wo7ium indigotin disulfonctq 860--0

動(dòng)物上皮細(xì)胞培養(yǎng)基EpiCM-a-prfBOC-L-高本酸shēng huà shì jì容量：100克

NCI-H1299細(xì)胞，人肺癌細(xì)胞 人胚腎上皮細(xì)胞,HK-2C細(xì)胞 真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)811-98-3氘代metxanol-d4 99.8 atoM D for NMR
收到人體膀胱癌組織源細(xì)胞如何處理？
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。

總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。             

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。     

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。            潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。