人體宮頸癌組織提取物【Cancer: Human Cervical Cancer Derivatives】
產(chǎn)品描述：宮頸癌是女性常見惡性腫瘤之一，由人類乳頭瘤病毒（HumanPapillomavirus，簡稱HPV）引起的，按病理組織學(xué)主要分為腺癌、腺角化癌和鱗狀細(xì)胞癌。公司科技提供來自新鮮或冷凍人宮頸癌組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。             

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。     

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。            潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。產(chǎn)品僅供科研使用

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項(xiàng)：
1. 接收到人體宮頸癌組織提取物，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
產(chǎn)品僅供科研使用2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL鹽酸曲唑酮(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Trazodone HCl

GES-1人胃上皮細(xì)胞 Human gasic epithelial cell GES-1 1640+10% FBS曲洛司坦/ 亞硝酸鹽環(huán)氧雄烷質(zhì)量規(guī)格：>99.0%,BRTrilostane

IFNA5 Protein Rat 重組大鼠 IFNA5 / IFNaG 蛋白 (His 標(biāo)簽)托伐普坦 質(zhì)量規(guī)格：度≥99.0%，BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)Tolvaptan

KP-N-NS(人腎上腺神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(腦轉(zhuǎn)移)) 5×106cells/瓶×2 破傷風(fēng)桿菌/梭菌Closidium tetani磺胺噻唑質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRSulfathiazole

表皮角化細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)磺胺噻唑(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：含量測定Sulfathiazole
CM-R042大鼠直腸平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL肯特肽抗體Anti-Kentsin質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

SGC7901細(xì)胞，人低分化胃癌細(xì)胞 轉(zhuǎn)染了tk基因的SW038-C2細(xì)胞,SW038-C2-tk細(xì)胞 長尾綠猴腎細(xì)胞;4647心房利鈉肽（1-28）,大鼠Atrial Natriuretic Peptide (1-28),rat質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

COS-1(非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2心房利鈉肽（126-149）Atrial Natriuretic Peptide (126-149) (rat)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

CCL1 Others Human 人 CCL1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 心房利鈉肽（126-150），大鼠Atrial Natriuretic Peptide (126-150) (rat)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

人腎癌Wilms細(xì)胞;G401心鈉素Ⅰ，大鼠Atriopeptin I (rat)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR
人體宮頸癌組織提取物IL2RB Others Human 人 IL2Rβ 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 甘酸鋅shēng huà shì jì容量：1公斤

CM-H020人胰島β細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL2,2-二基環(huán)炳晴 2,2-DiMqthylcyclopropyl Cycnidq 12778-61-2

HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/S1211394/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 乳香膠shēng huà shì jì容量：RT25克

胰蛋白酶(含10mL 酶解緩沖液) 1mLGOLDCHLORIDE四錄金酸,三水ACS級黃褐色晶體RTsigma

U-373MG-EGFP-puro[U-373MG-pLVT7](慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞 U-373MG-EGFP-puro[U-373MG-pLVT7] (leiviral consuct stable sain) of human brain glioma cells 1640+10%Hyclone 滅活血清+2μg/ml puromycin312619-45-7毒毛旋花苷-GNA
操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。