細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

人子宮組織提取物【Human Uterus: Normal Uterus Derivatives】
產(chǎn)品描述：子宮是產(chǎn)生月經(jīng)和孕育胎兒的器官，位于骨盆腔中央，在膀胱與直腸之間。子宮大小與年齡及生育有關(guān)，未產(chǎn)者約長(zhǎng)7.5cm、寬5cm、厚3cm，子宮可分為底、體與頸三個(gè)部分。公司科技提供來(lái)自新鮮或冷凍人子宮組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。        

cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。   

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。       

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜

注意事項(xiàng)：
1. 接收到人子宮組織提取物，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
產(chǎn)品僅供科研使用5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
大鼠膠原交聯(lián)(PYD)試劑盒 Rat pyridinoline,PYD ELISA Kit 萘酚AS  NaphtholAS  質(zhì)量規(guī)格：0.97

大鼠膠原酶I(CollagenaseI)ELISA檢測(cè)試劑盒RatCollagenaseIELISAKit 96T/48T 萘啶酮酸；萘啶酸  Nalidixic acid  質(zhì)量規(guī)格：>98%

大鼠膠原酶II(CollagenaseII)ELISA檢測(cè)試劑盒RatCollagenaseTypeIIELISAKit 96T/48T 萘丁美酮/萘普酮（標(biāo)準(zhǔn)品）  Nabumetone  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

大鼠膠質(zhì)細(xì)胞系來(lái)源的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)ELISA檢測(cè)試劑盒Ratglialcellline-derivedneuroophicfactor,GDNFELISAKIT 96T/48T 萘丁美酮/萘普酮  Nabumetone  質(zhì)量規(guī)格：>99%

大鼠膠質(zhì)細(xì)胞系來(lái)源的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(GDNF)試劑盒 Rat glial cell line-derived neuroophic factor,GDNF ELISA KIT 萘-D8(標(biāo)準(zhǔn)品)  Naphthalene-d8  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

大鼠角化細(xì)胞因子(KAF)/雙調(diào)蛋白(AR)試劑盒 Rat keratinocyte aocrine factor/Amphiregulin,KAF/AR ELISA Kit 萘-1,4,5,8-四羧酸二酐(>95.0%(HPLC)(T))  Naphthalene-1,4,5,8-tetracarboxylic Dianhydride  質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)(T)

大鼠角化細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)試劑盒 Rat Keratinocyte Growth Factor,KGF ELISA Kit 萘[2,3-a]芘(>98.0%(GC))  Naphtho[2,3-a]pyrene  質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)

大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA檢測(cè)試劑盒RatCaveolin-1,Cav-1ELISAKIT 96T/48T 耐斯糖（標(biāo)準(zhǔn)品）  NISTOSE  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

大鼠結(jié)蛋白(Des)ELISA檢測(cè)試劑盒RatDesmin,DesELISAKit 96T/48T 耐斯糖 HPLC≥98% 20mg

大鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA檢測(cè)試劑盒RatHaptoglobin,Hpt/HPELISAKIT 96T/48T 耐爾藍(lán)A(>65%,BS)  Nile blue A  質(zhì)量規(guī)格：>65%,BS
冰凍切片組織CASPASE-9蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20 替拉替尼  17-AAG   質(zhì)量規(guī)格：HSP90 抑制劑,BR,進(jìn)分

RatCollageypeⅠ,ColⅠELISA試劑盒大鼠Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 替拉替尼  17-AAG  質(zhì)量規(guī)格：HSP90 抑制劑,BR,進(jìn)分

小鼠生長(zhǎng)激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA試劑盒 ，英文名： GHRP-Ghrelin ELISA Kit 鹽酸特拉唑嗪  Terazosin HCl  質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,二水合物

小鼠紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseErythropoietieceptor,EPORELISAKit 96T/48T 睪酮,素  Testosterone   質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

人高分子量細(xì)胞角蛋白(CK-HMW)試劑盒 Human cytokeratin High Molecular Weight,CK-HMW ELISA Kit 睪酮(標(biāo)準(zhǔn)品)  Testosterone   質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%標(biāo)準(zhǔn)品

RatHeatShockProteinglycoprotein96,HSPgp96ELISAKit大鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 鹽酸丁卡因  Tetracaine HCl  質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR

BJ5183-AD-1鈣轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)菌100微升 鹽酸丁卡因（標(biāo)準(zhǔn)品）  Tetracaine HCl  質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測(cè)定

MouseIerferonβ,IFN-β/IFNBELISA試劑盒小鼠β干擾素(IFN-β/IFNB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 苯甲唑啉鹽酸鹽/鹽酸妥拉唑林  Tolazoline HCl  質(zhì)量規(guī)格：>98%,進(jìn)口原裝

小鼠生長(zhǎng)激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒 ，英文名： GHRP ELISA Kit 托特羅定  Tolterodine Tartrate  質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,M受體(毒蕈堿型乙酰膽堿受體)拮抗劑

小鼠酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子1(aFGF-1)ELISA檢測(cè)試劑盒Mouseacidicfibroblastgrowthfactor1,aFGF-1ELISAKit 96T/48T 托特羅定（標(biāo)準(zhǔn)品）  Tolterodine Tartrate  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定
人子宮組織提取物人結(jié)蛋白(Des)試劑盒 Human desmin ELISA Kit 酸性橙74  Acid Orange 74  質(zhì)量規(guī)格：>85%

人結(jié)締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)試劑盒 Human connective tissue-activating peptide Ⅲ,CTAPⅢ ELISA Kit 煌橙,藏花橙G  Crocein Orange G  質(zhì)量規(guī)格：BS

人結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanHaptoglobin,Hpt/HP 96T/48T 靛紅（吲哚醌）  Isatin  質(zhì)量規(guī)格：AR

人解脲脲原體抗體(UU-Ab)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanUreaplasmaurealyticumaibody,UU-Ab 96T/48T 孟加拉玫瑰紅,酸性紅94  Rose bengal  質(zhì)量規(guī)格：AR