操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。產(chǎn)品僅供科研使用
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

人胚胎滋養(yǎng)層組織提取物【Human Placental：Normal Placenta Trophoblast Derivatives】
產(chǎn)品描述：胚胎滋養(yǎng)層是母親子宮內(nèi)膜和發(fā)育中胚胎之間的營(yíng)養(yǎng)通路。緊貼在子宮壁的滋養(yǎng)層是胚胎著床必不可少的步驟，隨后形成胎盤。公司科技提供來(lái)自新鮮或冷凍人胚胎滋養(yǎng)層組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。             

cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。     

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。            潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：產(chǎn)品僅供科研使用
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
大鼠腎系膜細(xì)胞;RMC 骨肉瘤細(xì)胞，U-2 OS細(xì)胞 Walker-256細(xì)胞，大鼠肝癌細(xì)胞(癌細(xì)胞接種到肝臟成瘤)D-賴氨酸鹽酸鹽H-D-Lys-OH·HCl質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

HCT116, 人結(jié)直腸癌細(xì)胞 HumanD-甘露糖(標(biāo)準(zhǔn)品)D-Mannose質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

MSTN Others Mouse 小鼠 MSTN / GDF8 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) N-辛酰基-N-甲基葡糖胺(MEGA-8)N-Octanoyl-N-methylglucamine質(zhì)量規(guī)格：≥97% ,進(jìn)分

平衡鹽溶液HBSSN-癸?；?/span>-N-甲基葡糖胺(MEGA-10)N-Decanoyl-N-methylglucamine 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

IL17RA Others Rat 大鼠 IL17RA / IL17R 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 辛基-β-D-硫代吡喃葡萄糖苷n-Octyl-β-D-Thioglucopyranoside質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
HFL1人胚肺成纖維細(xì)胞 HFL1 in human embryo lung fibroblasts F12K培養(yǎng)基+10%FBS鋅試劑(≥85%（HPLC）)Zincon質(zhì)量規(guī)格：≥85%（HPLC）

SCGB1A1 Protein Mouse 重組小鼠 Uteroglobin / SCGB1A1 蛋白 (His 標(biāo)簽)1,3-二甲基-5-吡唑酮1,3-Dimethyl-5-pyrazolone質(zhì)量規(guī)格：0.96

人胚腎二倍體細(xì)胞;CCC-HEK-1 人氣管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL氟啶胺（標(biāo)準(zhǔn)品）Fluazinam質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠骨髓瘤細(xì)胞;Sp2/0-Ag14氟節(jié)胺（標(biāo)準(zhǔn)品）Flumetralin質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

CD300A Others Human 人 CD300A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 氯吡脲（標(biāo)準(zhǔn)品）Forchlorfenuron質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品
人胚胎滋養(yǎng)層組織提取物豹貓皮膚成纖維樣細(xì)胞;LCS5正嶙酸鐵四水物shēng huà shì jì容量：100克

VCL Others Mouse 小鼠 VCL / Vinculin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 2,6-二酚 2,6-,99%  100G 通用試劑

CL-0109HK-2(人腎小管上皮細(xì)胞)5×106cells/瓶×2乳果糖;;;4-O-β-D-半乳糖基-4-D-呋果糖 Lcctulosq;4-O-β-D-Glcctosyl-D-fructosq;Lcqvilcc 4618-18-

KMB-17細(xì)胞，人二倍體細(xì)胞系 轉(zhuǎn)HLA-2基因B細(xì)胞,T2細(xì)胞 KM小鼠子瘤株;U27納他霉素，英文名或英文縮寫：Pimaricin，級(jí)別：BR，規(guī)格：100毫克

B16(小鼠色素瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2(錄化溶液)
注意事項(xiàng)：
1. 接收到人胚胎滋養(yǎng)層組織提取物，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。