上海谷研實業(yè)有限公司
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人小腸粘膜組織提取物
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操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內完全解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。產品僅供科研使用
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養(yǎng)。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
人小腸粘膜組織提取物【Intestinal: Normal Human Intestinal Mucosa Derivatives】
產品描述:小腸粘膜是機體內外環(huán)境的重要屏障,持續(xù)暴露于大量抗原中,也是機體面對病原微生物的第一道防線。公司科技提供來自新鮮或冷凍人小腸粘膜組織中高質量的總RNA,PCR準備的第一條cDNA鏈,蛋白質及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標本采集自各地方醫(yī)院,采集工作根據IRB和HIPAA批準的方案進行。所有的產品在發(fā)貨之前均經過嚴格的QA/QC流程以確保其質量。這些產品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應體系進行逆轉錄,體系中包括MMLV反轉錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產品在訂單發(fā)貨之前都經過了嚴格的QA/QC分析,保證產品的質量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin),離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。 潛在的應用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質組學;<6>芯片研究與表達圖譜。
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
人小腸粘膜組織提取物 | Intestinal: | GOY-Y6846 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:產品僅供科研使用
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
以下是公司正在熱銷的產品:
大鼠微管相關蛋白2(MAP-2)試劑盒 Rat microtubule-associated protein 2,MAP-2 ELISA Kit 氯化血根堿 HPLC≥98% 20mg
大鼠微纖絲相關糖蛋白3(MFAP3)試劑盒 Rat Microfibril-associated glycoprotein 3,MFAP3 ELISA kit 氯化纈草素 HPLC≥98% 0.1mL
大鼠維生素A(VA)ELISA檢測試劑盒RatVitaminA,VAELISAKit 96T/48T 氯化天竺葵素O蕓香糖苷 HPLC≥95% 20mg
大鼠維生素A(VA)試劑盒 Rat Vitamin A,VA ELISA Kit 氯化天竺葵素,O雙葡萄糖苷 HPLC≥95% 20mg
大鼠維生素B12(VB12)ELISA檢測試劑盒RatVitaminB12,VB12ELISAKit 96T/48T 氯化鍶六水 Strontium chloride, hexhydrate 質量規(guī)格:AR,≥99%
大鼠維生素B12(VB12)試劑盒 Rat Vitamin B12,VB12 ELISA Kit 氯化鈰七水 Cerium (III) chloride, heptahydrate 質量規(guī)格:>99.9%
大鼠維生素B6(VB6)ELISA檢測試劑盒RatVitaminB6,VB6ELISAKit 96T/48T 氯化矢車菊素O槐糖苷 HPLC≥98% 20mg
大鼠維生素B6(VB6)試劑盒 Rat Vitamin B6,VB6 ELISA Kit 氯化矢車菊素O阿拉伯糖苷 HPLC≥95% 20mg
大鼠維生素C(VC)ELISA檢測試劑盒RatVitaminC,VCELISAKit 96T/48T 氯化矢車菊素,(標準品) Cyanidin Chloride 質量規(guī)格:HPLC≥98%,標準品
大鼠維生素C(VC)試劑盒 Rat Vitamin C,VC ELISA Kit 氯化矢車菊素 HPLC≥98% 20mg
小鼠趨化因子C-C-基元配體3樣蛋白1(CCL3L1)ELISA試劑盒 ,英文名: CCL3L1 ELISA Kit 阿戈美拉?。?/span>II型) Agomelatine 質量規(guī)格:>99%,II晶型
豬白介素17(IL-17)ELISA檢測試劑盒Porcineierleukin17,IL-17ELISAKit 96T/48T 阿戈美拉?。?/span>I型) Agomelatine 質量規(guī)格:>98.5%,I晶型
大鼠壞死因子γ(TNF-γ)試劑盒 Rat tumor necrosis factor γ,TNF-γ ELISA Kit 吡拉西坦 Piracetam 質量規(guī)格:>99%
英文名稱HumanAILR4ELISAKIT人AILR4規(guī)格:96T/48T 雷美替胺 Ramelteon 質量規(guī)格:>98.5%
動物組織冰凍切片糖蛋白高酸希爾(PAS)法阿爾新藍(ALCIANBLUE)染色試劑盒50 拉科酰胺 Lacosamide 質量規(guī)格:>98%
SheepIerleukin1,IL-1ELISA試劑盒綿羊白介素1(IL-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 米那普侖鹽酸鹽 Milnacipran 質量規(guī)格:>98%
小鼠趨化因子C-C-基元配體1(CCL1)ELISA試劑盒 ,英文名: CCL1 ELISA Kit 米那普侖鹽酸鹽(標準品) Milnacipran 質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
豬主要組織相容性復合體Ⅱ類(MHCⅡ/SLAⅡ)ELISA檢測試劑盒swinemajorhistocompatibilitycomplexⅡ,MHCⅡ/SLAⅡELISAKit 96T/48T 丁苯那嗪 Tetrabenazine 質量規(guī)格:>99%
大鼠壞死因子β(TNF-β)試劑盒 Rat Tumor necrosis factor β,TNF-β ELISA KIT 丁苯那嗪(標準品) Tetrabenazine 質量規(guī)格:HPLC>98%,標準品
英文名稱HumanAILR3(h)ELISAKIT人AILR3規(guī)格:96T/48T 氨己烯酸 Vigabatrin 質量規(guī)格:>99%
人小腸粘膜組織提取物人白介素4受體(IL4R/CD124)試劑盒 Human Ierleukin 4 receptor,IL4R/CD124 ELISA Kit 8-氨基-1,3,6-萘三磺酸二鈉鹽水合物(>99.0%(HPLC)(T)) Di (trifluoromethyl)coumarin 質量規(guī)格:>97.0%(GC)(T)
人白三烯B4(LTB4)試劑盒 Human Leukoiene B4,LT-B4 ELISA Kit 7-(二乙基氨基)香豆素-3-羧酸(>98.0%(GC)(T)) 7-(Diethylamino)coumarin-3-carboxylic Acid 質量規(guī)格:>98.0%(GC)(T)
注意事項:
1. 接收到人小腸粘膜組織提取物,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)基用吸管完全吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。