細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

人髂動(dòng)脈組織提取物【Cardiac: Normal Human Iliac Artery Derivatives】
產(chǎn)品描述：公司科技提供來自新鮮或冷凍人髂動(dòng)脈組織中高質(zhì)量的總RNA，PCR準(zhǔn)備的條cDNA鏈，蛋白質(zhì)及其亞組分。這些定義的正常人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。        

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，產(chǎn)品的質(zhì)量。   

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。       

潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克?。?span lang="EN-US"><2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜

注意事項(xiàng)：
1. 接收到人髂動(dòng)脈組織提取物，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精（建議配置75%的酒精的水是過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
產(chǎn)品僅供科研使用5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

以下是公司正在的產(chǎn)品：
大鼠細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3)試劑盒 Rat iercellular adhesion molecule 3,ICAM-3 ELISA Kit 氯化飛燕草素O桑布雙糖苷 HPLC≥95% 20mg

大鼠細(xì)胞角蛋白18-M30(CK 18-M30)試劑盒 Rat Cytokeratin 18-M30,CK 18-M30 ELISA kit 氯化飛燕草素O葡萄糖苷 HPLC≥95% 20mg

大鼠細(xì)胞角蛋白18-M65(CK 18-M65)試劑盒 Rat cytokeratin 18-M65,CK 18-M65 ELISA kit 氯化飛燕草素O半乳糖苷 HPLC≥95% 20mg

大鼠細(xì)胞膜鈣ATP酶1(ATP2B1)試劑盒 Rat Plasma membrane calcium-anspoing ATPase 1,ATP2B1 ELISA kit 氯化飛燕草素O阿拉伯糖苷 HPLC≥95% 20mg

大鼠細(xì)胞色素b5 試劑盒 Rat Cytochrome b5 ELISA Kit 氯化飛燕草素,O二葡萄糖苷 HPLC≥95% 20mg

大鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA檢測(cè)試劑盒RatCytochrome-C,Cyt-CELISAKit 96T/48T 氯化膽堿（標(biāo)準(zhǔn)品）  Choline chloride  質(zhì)量規(guī)格：TLC法檢查

大鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)試劑盒 Rat Cytochrome-C,Cyt-C ELISA Kit 氯化膽堿  Choline chloride  質(zhì)量規(guī)格：>98%,適用于細(xì)胞培養(yǎng)

大鼠細(xì)胞色素C氧化酶(COX)試劑盒 Rat cytochrome C oxidase,COX ELISA Kit 氯化膽(來自牛脂)(>87.0%(GC))  Cholesteryl Chloride from Beef Fat  質(zhì)量規(guī)格：>87.0%(GC)

大鼠細(xì)胞色素P450 1A1(CYP1A1)試劑盒 Rat Cytochrome P450 1A1,CYP1A1 ELISA Kit 氯化鉍(>98%,BR)  Bismuth (III) chloride  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

大鼠細(xì)胞色素P450 3A4(CYP3A4)試劑盒 Rat Cytochrome P450 3A4,CYP3A4 ELISA Kit 氯化銨(AR)  Ammonium chloride  質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,AR
動(dòng)物組織鈣ATP酶(Ca++-ATPase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20 吡嗪酰胺  Pyrazinamide  質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP

SheepIerleukin2,IL-2ELISA試劑盒綿羊白介素2(IL-2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 吡嗪酰胺（標(biāo)準(zhǔn)品）  Pyrazinamide  質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

小鼠巰基酸硫轉(zhuǎn)移酶(MPST)ELISA試劑盒 ，英文名： MPST ELISA Kit 鹽酸地美環(huán)素；去甲基金霉素  Demeclocycline   質(zhì)量規(guī)格：>900μg/mg,BR

豬血管生成素1(ANG-1)ELISA檢測(cè)試劑盒PorcineAngiopoietin1,ANG-1ELISAKit 96T/48T 鹽酸地美環(huán)素；去甲基金霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)  Demeclocycline   質(zhì)量規(guī)格：效價(jià)測(cè)定,標(biāo)準(zhǔn)品

大鼠壞死因子(配體)超家族成員14(TNFSF14)試劑盒 Rat tumor necrosis factor(ligand)superfamily, member 14,TNFSF14 ELISA kit 甲基帕羅西汀  N-Methyl Paroxetine  質(zhì)量規(guī)格：>99%

英文名稱HumanAIL(h)ELISAKIT人AIL規(guī)格：96T/48T 硫酸頭孢喹諾  Cefquinome sulfate  質(zhì)量規(guī)格：干品Cefquinome>80%,BR

動(dòng)物組織鈣鎂ATP酶(Ca++/Mg++-ATPase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20 頭孢噻呋鈉  Ceftiofur   質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

SheepIerleukin6,IL-6ELISA試劑盒綿羊白介素6(IL-6)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 頭孢噻呋鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)  Ceftiofur   質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

小鼠氫/離子交換ATP酶β肽(ATP4β)ELISA試劑盒 ，英文名： ATP4β ELISA Kit 5'-三胞苷二鈉鹽(二水)  Cytidine-5'-triphosphate(CTP) di salt dihydrate  質(zhì)量規(guī)格：>97%,分子生物學(xué)級(jí)

豬血管生成素受體Tie2(ANG-R-Tie2)ELISA檢測(cè)試劑盒Porcineangiopoietieceptoie2,ANG-R-Tie2ELISAkit 96T/48T 伏格列波糖  Voglibose  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
人髂動(dòng)脈組織提取物RatCyclin-D1ELISA試劑盒大鼠細(xì)胞周期素D1(Cyclin-D1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 氯化飛燕草素O蕓香糖苷 HPLC≥95% 20mg

RatCyclin-D2大鼠細(xì)胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 氯化飛燕草素,O二葡萄糖苷 HPLC≥95% 20mg

RatCyclin-D2ELISA試劑盒大鼠細(xì)胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 氯化失車菊素,O雙葡萄糖苷 HPLC≥95% 20mg

RatCyclin-D3大鼠細(xì)胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 二氫葫蘆素B HPLC≥95% 20mg

RatCyclin-D3ELISA試劑盒大鼠細(xì)胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 葫蘆素B OBetaD葡萄糖苷 HPLC≥95% 20mg

RatCyclosporineA,CsA大鼠環(huán)孢素A(CsA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 甲基新苦木素 HPLC≥95% 20mg

RatCyclosporineA,CsAELISA試劑盒大鼠環(huán)孢素A(CsA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T ,二去氫隱丹參酮 HPLC≥95% 20mg

RatCystatinC,Cys-C大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 丹參二醇A HPLC≥95% 20mg

RatCystatinC,Cys-CELISA試劑盒大鼠半胱氨酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 丹參二醇B HPLC≥95% 20mg

RatCytochrome-C,Cyt-C大鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 丹參二醇C HPLC≥95% 20mg