參數(shù)規(guī)格：
小鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞提取物【Mouse Lung: Normal Vein Smooth Muscle Cell Derivatives】
產(chǎn)品描述：小鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞提取物是從小鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞提取的，小鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞從正常小鼠肺大靜脈組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。             

cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。     

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。            潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。

凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明 ：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
培養(yǎng)操作:
產(chǎn)品僅供科研使用1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi)；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
腦動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)苝(升華提)(>99.0%(GC))Perylene (purified by sublimation)質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(GC)

CA46細(xì)胞，人Butts瘤細(xì)胞系 小鼠Lewis肺癌瘤株,LLT細(xì)胞 人肝臟星形細(xì)胞裂解物HHSteCL1,1,4,4-四苯基-1,3-丁二1(>99.0%(HPLC))1,1,4,4-Tetraphenyl-1,3-butadiene質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(HPLC)

NCI-H295R(人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×28-羥基米氮平β-D-葡萄糖苷酸8-Hydroxy Mirtazapine β-D-Glucuronide

CCRF-CEM(人急性白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0094HCC827(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞肉瘤低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記);DG6-GFP8-羥基米氮平8-Hydroxy Mirtazapine

綠色熒光蛋白標(biāo)記小鼠前胃癌細(xì)胞;MFC-GFPN,N-二乙酰 去-5'-氯-4-氟代芐基莫沙必利N,N-Diacetyl Des-5'-chloro-4-fluorobenzyl Mosapride
大鼠腎系膜細(xì)胞;RMC塞來(lái)昔布羧酸Celecoxib Carboxylic Acid

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS2 細(xì)胞，HeLa 229細(xì)胞 EAC-E2G8細(xì)胞，鼠腹水瘤4'-反式-羥基西洛他唑4'-trans-Hydroxy Cilostazol

人胚胎心肌組織來(lái)源細(xì)胞;CCC-HEH-23,4-脫氫西洛他唑3,4-Dehydro Cilostazol

POSTN Others Mouse 小鼠 POSTN / OSF2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 西洛他唑-d11Cilostazol-d11

胃粘膜上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)去二甲基氯化西酞普蘭鹽酸鹽Didemethylchloro Citalopram Hydrochloride
Hut-102(人皮膚T瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2(R)-(+)-4'-羥苯基卡維地洛(R)-(+)-4'-Hydroxyphenyl Carvedilol

Promocell C-22020 Endothelial Cell GrowthMedium MV, 內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基MV(即用型) 500ml4'-芐氧基卡維地洛4'-Benzyloxy Carvedilol

人食道上皮細(xì)胞裂解物HEEpiCL卡維地洛-甲基-d3Carvedilol-methyl-d3

HEXA Others Human 人 Hexosaminidase A / HEXA Subunit A 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 卡維地洛β-D-葡萄糖苷酸(mixture of diasteromers)Carvedilol β-D-Glucuronide (mixture of diasteromers)

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HCT-15 [HCT15](S)-(-)-1-苯乙醇(>98.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(S)-(-)-2-Methyl-1-butanol
小鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞提取物CD4 Others Human 人 CD4 / LEU3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) ，英文名或英文縮寫(xiě)：wo7ium metasilicate nonahydrate，級(jí)別：CP，70%，規(guī)格：5克

SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-7膽紅速(+4℃) Bilirubin 632-62-4

EPHA7 Others Human 人 EphA7 / EHK3 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 1-溴代，英文名或英文縮寫(xiě)：1-Bromooctane，級(jí)別：AR，47.8%，規(guī)格：100克

CL-0225SW620(人結(jié)腸癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2BOC-Nim-芐基-L-組酸5克RT，避光

HAVSMC, 人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 小鼠T細(xì)胞瘤(SV40T抗原轉(zhuǎn)染)，Cyc-tAg細(xì)胞 HMy2.CIR(人B 母細(xì)胞)Peptonepacto 100g/500g原裝 BD 211677
收到小鼠肺大靜脈平滑肌細(xì)胞提取物如何處理？
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。