成人皮膚成纖維細胞取物【Human Skin: Normal Dermal Fibroblasts Derivatives】
產(chǎn)品描述：人皮膚成纖維細胞提取物是從人原代皮膚成纖維細胞提取的，人原代皮膚成纖維細胞從正常人皮膚成纖維組織制備。正常成人皮膚成纖維組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準的方案進行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。             

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應10min 后終止RT反應。利用1x RT Buffer 運輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。     

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。            潛在的應用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標測序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學；<6>芯片研究與表達圖譜。產(chǎn)品僅供科研使用

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項：
1. 接收到成人皮膚成纖維細胞取物，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
產(chǎn)品僅供科研使用2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

MousePlatelet-DerivedGrowthFactorSolubleReceptorα,PDGFsR-αELISA試劑盒小鼠血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 二乙基錫(標準品)  Diethyltin-dichloride  質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,10ng/μl溶于環(huán)己烷

小鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)ELISA試劑盒 ，英文名： OVA sIgE ELISA Kit 草萘胺(標準品)  Napropamid  質(zhì)量規(guī)格：分析標準品

大鼠雌二醇(E2)ELISA檢測試劑盒RatEsadiol,E2ELISAKit 96T/48T 除蟲脲標準溶液(10μg/ml,u=3%)  Diflubenzuron solution  質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=3%

人毒蕈堿型乙酰膽堿受體M2(mAChRM2)自身抗體試劑盒 Human muscarinic acetylcholine receptor M2(mAChRM2)aoaibody ELISA kit 二噻農(nóng)(標準品)  Dithianon  質(zhì)量規(guī)格：分析標準品

RatMotilin,MTLELISAKit大鼠胃動素(MTL)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 棉隆(標準品)  Dazomet  質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,97%

DNA探針聚合酶整合標記試劑盒10 雙(標準品)  Dichlorophene  質(zhì)量規(guī)格：分析標準品

MouseProAialNaiureticPeptide,Pro-ANPELISA試劑盒小鼠前心肽(Pro-ANP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 異丙凈(標準品)  Dipropetryn  質(zhì)量規(guī)格：分析標準品

小鼠卵泡抑素樣蛋白3(FSTL3)ELISA試劑盒 ，英文名： FSTL3 ELISA Kit 異菌脲標準溶液(100μg/ml,u=4%)  [3-(3,5-Dichlorophenyl)-2,4-dioxoimidazolidinyl]-N-(methylethyl)carboxamide standard solution  質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=4%

人凝聚素(CLU)ELISA檢測試劑盒Humanclusterin,CLUELISAKit 96T/48T 異氯磷(標準品)  Dicapthon  質(zhì)量規(guī)格：分析標準品
雙白瑞香素

 Daphnoretin

分子式： C19H12O7

分子量： 352.297

CAS號： 2034-69-7

檢測方式：高效液相色譜法HPLC≥98%

規(guī)格：20mg50mg100mg500mg1g (可根據(jù)客戶需求包裝)

性狀： 本品為微黃色細針晶

作用與用途：本品用于含量測定。

提取來源：

本品為瑞香科植物了哥王[Wikstroemia viridiflora(Meissn.)Hook.f.(W.indica C.A.Mey.)的根等。

藥理性質(zhì)：熔點250～252℃

用法：

色譜條件:流動相：0.1%水-(48:52)；檢測波長為282nm (僅供參考)

貯藏方法：

2-8°C，置陰涼干燥處、避光保存。

注意事項：本品應在低溫下保存，長時間在暴露在空氣中，含量會有所降低。

成人皮膚成纖維細胞取物蛋白質(zhì)西方雜交10倍印跡膜轉(zhuǎn)移緩沖液500毫升 海藻酸鈉   alginate from brown;Algin  質(zhì)量規(guī)格：BR,度>98%

蛋白質(zhì)西方雜交印跡DAB顯色檢測試劑盒5 膠原酶I型(sigma)  Collagenase, Type1  質(zhì)量規(guī)格：≥125 CDU/mg ,Sigma分裝

蛋白質(zhì)西方雜交印跡ECL化學發(fā)光檢測試劑盒(含抗體)5 膠原酶II型(sigma)  Collagenase, Type2  質(zhì)量規(guī)格：≥125 CDU/mg ,Sigma分裝

蛋白質(zhì)西方雜交印跡ECL化學發(fā)光檢測試劑盒5 膠原酶IV型(sigma)  Collagenase, TypeIV  質(zhì)量規(guī)格：≥160 CDU/mg,Sigma分裝

蛋白質(zhì)西方雜交印跡消除試劑盒20 鉬酸鈉二水(AR)   molybdate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR

蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印印跡膜麗春紅(PonceauS)染色試劑盒20 硅酸鎂（高）  Magnesium silicate  質(zhì)量規(guī)格：>98%

蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印印跡膜萘酚藍黑(NBB)染色試劑盒20 L-抗壞血酸鈉   L-ascorbate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

蛋類L-乳酸比色法定量檢測試劑盒20 焦鈉(AR)   pyrophosphate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR

蛋類琥珀酸比色法定量檢測試劑盒20 碳酸氫銨(AR)  Ammonium bicarbonate  質(zhì)量規(guī)格：AR

蛋類羥比色法定量檢測試劑盒20 氯化銨(AR)  Ammonium chloride  質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,AR
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。