人胚胎絨毛膜細(xì)胞提取物【Human Embryo : Normal Embryonic Chorion Cell Derivatives】
產(chǎn)品描述：人胚胎絨毛膜細(xì)胞提取物是從人胚胎絨毛膜細(xì)胞提取的，人胚胎絨毛膜細(xì)胞從正常人胚胎絨毛膜組織制備。正常人胚胎絨毛膜組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。             

cDNA制備：純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。     

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)，離心去除組織碎片，通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。            潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克??；<2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。產(chǎn)品僅供科研使用

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項(xiàng)：
1. 接收到人胚胎絨毛膜細(xì)胞提取物，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
產(chǎn)品僅供科研使用2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
人Burkkit瘤細(xì)胞;Daudi 大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLPS48PS 48質(zhì)量規(guī)格：>99%,PDK1 activator

MMQ 小鼠垂體瘤細(xì)胞阿巴卡韋5'-β-D-葡萄糖苷酸Abacavir 5'-β-D-Glucuronide

FETUB Others Human 人 Fetuin-B / FETUB 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 4-(三氟甲基)煙酰胺4-(Trifluoromethyl)nicotinamide

人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞;NCI-H19751-甲基-煙酰胺化物1-Methyl-nicotinamide Iodide

SLAMF6 Others Human 人 SLAMF6 / Ly108 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 煙酰胺-2,4,5,6-d4Nicotinamide-2,4,5,6-d4
非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS5A;Vero-HCV-NS5A鹽酸阿比朵爾（標(biāo)準(zhǔn)品）Arbidol HCl質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

C6, 大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞阿加曲班Argatroban質(zhì)量規(guī)格：>99%,超,細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)

人癌細(xì)胞;MCF 7B 大鼠肺大動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL阿加曲班（標(biāo)準(zhǔn)品）Argatroban質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

雪旺氏細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)醋酸精氨酸加壓素Argipressin Acetate質(zhì)量規(guī)格：度98%

EFNB2A Others Danio rerio (zebrafish) 斑馬魚 EFNB2A / Ephrin B2a 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 阿替洛爾Atenolol質(zhì)量規(guī)格：度大于98%,USPgrade
斑馬魚尾鰭細(xì)胞;AB.9N-叔丁氧羰基-D-天冬酰，英文名或英文縮寫：Boc-D-asparagine，級(jí)別：BR，98%，規(guī)格：1克

DPP4 Others Human 人 DPPIV 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) ;芐基溴;α-溴本 Bqnzyl broMidq;ω-BroMotoluqnq

人肺癌細(xì)胞;A-427 [A427]葡聚糖凝膠 Sephade... Sephadex G-25 Superfine 9041-35-4 100G 分離試劑

人卵巢上皮細(xì)胞(HOSEpiC) ( 5×105 )司班85，英文名或英文縮寫：Span 85，級(jí)別：AR，87%，規(guī)格：100克

CM-R056大鼠腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mLMaltExtract 100g/500g BD/Sigma分裝
人胚胎絨毛膜細(xì)胞提取物大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞G-6-P-Naβ-D-葡萄糖-6-嶙酸鈉鹽100毫克高，98%

FCGR2A Others Human 人 CD32a / FCGR2A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 3-羥基-5-甲基異惡唑 Hymexazol,97% 10004-44-1 5G 通用試劑

人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞RNAHAEC miRNA5 μg醋醋拂輕;醋醋膚輕 Fluocinonidq 67-73-

SK-N-SH細(xì)胞，神經(jīng)母細(xì)胞瘤 人肺腺鱗癌細(xì)胞,NCI-H596細(xì)胞 人腦血管平滑肌細(xì)胞甲紅，英文名或英文縮寫：MR，級(jí)別：超，98%，規(guī)格：5克

豚鼠源細(xì)胞63148-58-3甲基本基硅油Silicone oil (high temperature)
操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。