細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

大鼠子宮頸上皮細胞【RatCervix:CervicalEpithelialCells】
產(chǎn)品描述：宮頸壁由黏膜、肌層和外膜組成。宮頸管黏膜即子宮頸內(nèi)膜，由分泌黏液的單層柱狀上皮覆蓋，上皮在固有層下陷成腺樣隱窩，習(xí)慣稱為子宮頸腺，能分泌黏液，成為白帶的主要組成部分；②在宮頸管內(nèi)膜表面和腺體柱狀上皮下方、基底膜上方有儲備細胞，具有增生和可以分化為柱狀上皮細胞和化生為鱗狀上皮的雙向分化潛能。公司提供的大鼠子宮頸上皮細胞采用膠原酶消化制備而來。細胞的培養(yǎng)采用公司專利產(chǎn)品大鼠子宮頸上皮細胞培養(yǎng)試劑盒(RatCervixPrimaCell:NormalCervicalEpithelialCellsCatNo.3-7316)來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞（如脂肪細胞、纖維細胞等）的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標準的操作流程下，大鼠子宮頸上皮細胞可以保持原代細胞的分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的大鼠源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
注意事項：
1. 接收到大鼠子宮頸上皮細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。
產(chǎn)品僅供科研使用5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
人肝內(nèi)膽管上皮細胞總RNAHIBEpiC NA托瑞米芬(標準品)Toremifene 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

PAK3 Others Human 人 PAK3 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 奧昔布寧N氧化物Oxybutynin N-Oxide

HGF Protein Human 重組人 HGF / Hepatocyte Growth Factor 蛋白3,5-Dimetxylpxenol3,5-兒價分25克BR，98%

人胚肝二倍體細胞;CCC-HEL-1 人支氣管上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL環(huán)丁烷-1，1-二羧醋 1,1-Cyclobutcnqdiccrboxylic ccid 2442-21-

人肺支氣管癌細胞;NCI-H1650碳醋錳 Mcngcnqsq ccronctq 298-6-9

CD40 Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 CD40 / TNFRSF5 人細胞裂解液 (陽性對照) 4,4-二羧基-2,2-聯(lián)二鈉，英文名或英文縮寫：BCA，級別：CP，99%，規(guī)格：25克

A172人膠質(zhì)母細胞瘤細胞 A172 human glioblastoma cells DMEM+10% FBS20989-17-7L-本甘醇(S)-(+)-2-pxenylglycinol
大鼠子宮頸上皮細胞SW1353細胞，骨肉瘤細胞 人鼻咽癌細胞(低分化),CNE2細胞 CL-0265CAL-27(人舌鱗癌細胞)5×106cells/瓶×2固深紅GBC，英文名或英文縮寫：Fast Garnet GBC salt，級別：超，98%，規(guī)格：5克

中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS4A頭孢匹安 CqfpircMidq 70797-11-4

HAVCR1 Others Human 人 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 人細胞裂解液 (陽性對照) WATER,STERILE,NUCLEASE-FREE無菌水(無核酸酶,DEPC處理過)生物技術(shù)級透明無色液體RTsigma

非洲綠猴腎細胞系/IgRCD4+;VERO/IgRCD4+利格寧，英文名或英文縮寫：Lignin alkalie，級別：BR，99%，規(guī)格：5克

TNFSF12 Others Rat 大鼠 TNFSF12 人細胞裂解液 (陽性對照) a-Cyclodextran 250mg/500mg/5g 原裝 Sigma C4642