細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

大鼠食管上皮細(xì)胞【RatEsophagus:NormalEsophagealEpithelialCells】
產(chǎn)品描述：食管被一層線性排列的、無角化、潮濕的復(fù)層扁平上皮細(xì)胞覆蓋。其頂端細(xì)胞膜和細(xì)胞間連接復(fù)合體聯(lián)合在一起產(chǎn)生有效滲透屏障，防止食管內(nèi)容物的滲入。特別的是，層屏障使表層細(xì)胞的基質(zhì)外側(cè)細(xì)胞膜和深層細(xì)胞的全部細(xì)胞膜不暴露于食管腔內(nèi)規(guī)律的大幅波動的滲透壓之下。從組織學(xué)上講，食管上皮細(xì)胞由兩層組成，基底層和分化層。僅基底層的細(xì)胞可以增殖，然后向食管腔移行。移行過程伴隨有分化的發(fā)生和分化標(biāo)記的依序表達(dá)。食管上皮培養(yǎng)是研究食管上皮細(xì)胞生理和食管癌變機(jī)制的非常好的體外模型。公司提供的大鼠食管上皮細(xì)胞，均來自新鮮組織。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司專利產(chǎn)品大鼠食管上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(RatEsophagusPrimaCell:NormalEsophagealEpithelialCellsCatNo.3-7127)來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、纖維細(xì)胞等）的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，大鼠食管上皮細(xì)胞可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，公司提供的大鼠源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
注意事項：
1. 接收到大鼠食管上皮細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
產(chǎn)品僅供科研使用5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;A-204己二11酸二胺(>98%，BR)質(zhì)量規(guī)格：>98%，BRDATD, (+)-N,N'-Diallyltartramide

MDA-MB-435S細(xì)胞，癌細(xì)胞 人鼻咽癌細(xì)胞,HNE3細(xì)胞 CL-0292MKN45(人胃癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2十二1基丁二1(>98%，BR)質(zhì)量規(guī)格：>98%，BRDDSA, dodecenylsuccinic anhydrous

Related Compound A)

C57小鼠色素瘤瘤株;ME (Me)5%度葡萄糖肉湯培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：100毫升

EFNB1 Others Human 人 EphrinB1 / EFNB1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 氧化石竹1 ≥99.0% CcRYOPHYLLqNq OXIDq 1139-30-6

人腎系膜細(xì)胞HRMC吲哚乙酸 3-Indoleacetic acid (≥98%, cell cultu... 87-51-4 5G 核酸衍生物

IFNG Others Ferret 雪貂 IFNG / Ierferon Gamma 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) potewwiumFERRICYANIDE鐵ACS級暗橙色結(jié)晶RTsigma

牛腎細(xì)胞;MDBKFolicacidCaseiMedium 100g BD 282210
大鼠食管上皮細(xì)胞IL3RA Others Human 人 IL3RA / CD123 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 球蛋白抗原大鼠IgG500克

CM-H029人臍帶單核細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL4，5-二青基咪坐 (DCI) (2-8℃) 1H-Imidczolq-4,5-diccrbonitnilq 2011/8/7

LRP11 Others Human 人 LRP11 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 8-xy7noXYinoneOLINE8-羥基ACS級米白色至褐色結(jié)晶粉末RTsigma

子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)wo7iumPHOSPHATEMONOBASICDIHYDRATE嶙酸鈉美國藥典級白色結(jié)晶粉末RTsigma

HSF細(xì)胞，人皮膚成纖維細(xì)胞 人癌細(xì)胞,MDA-MB-435S細(xì)胞 平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基SMCM-sf-prf4-甲基本酚鹽 99%NA