細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

小鼠表皮黑色素細(xì)胞【MouseSkin:NormalMelanocytes】
產(chǎn)品描述：小鼠表皮黑色素細(xì)胞主要分布于位于表皮的基底層，與表皮細(xì)胞共同組成表皮黑素單位，其主要功能是產(chǎn)生黑素小體保護(hù)皮膚免受損害。公司提供的小鼠表皮黑色素細(xì)胞，采用胰蛋白酶法制備而來(lái)。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司專利產(chǎn)品小鼠表皮黑色素細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(MouseSkinPrimaCell:NormalMelanocytesCatNo.3-4582)來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、纖維細(xì)胞等）的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，小鼠表皮黑色素細(xì)胞傳5代仍可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
公司提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
注意事項(xiàng)：
1. 接收到小鼠表皮黑色素細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
人間充質(zhì)干細(xì)胞-肝臟裂解物HMSC-hp L超細(xì)高嶺土(6000(3.5um))Kaolin(superfine)質(zhì)量規(guī)格：6000(3.5um)

AXR2 Others Mouse 小鼠 AXR2 / CMG2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 高嶺土(醫(yī)藥級(jí))Kaolin質(zhì)量規(guī)格：醫(yī)藥級(jí)

正常小鼠Leydig細(xì)胞;TM3硅藻土G(TLC專用)Kieselguhr G質(zhì)量規(guī)格：TLC專用

小鼠誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞;PUMC-mips-D2 III型膠原酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL硅膠(AR)Silica gel質(zhì)量規(guī)格：AR

EC109，人食管癌細(xì)胞 Human二氧化硅(99.99%,1-3mm)Silicon dioxide質(zhì)量規(guī)格：99.99%,1-3mm
中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-5beta 41,2.5 CL5 Carrying P5b/dhfr異佛手柑內(nèi)酯Isobergapten質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

RGMA Others Human 人 RGMA 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 異甘草苷（標(biāo)準(zhǔn)品）Isoliquiritin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

A375 人惡性色素瘤細(xì)胞雷馬曲班Ramatroban;BAY u3405質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

C6-EGFP-puro(慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 C6-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) of rat brain glioma cells DMEM+10% FBS+2ug/ml puromycin異鉤藤堿(標(biāo)準(zhǔn)品)Isorhynchophylline質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

RSPO2 Protein Human 重組人 FTLS / RSPO2 蛋白 (186 Leu/Pro, Fc 標(biāo)簽)異葒草苷(標(biāo)準(zhǔn)品)luteolin-6-C-glucoside質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
NCI-H23細(xì)胞，人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 小鼠成纖維細(xì)胞,3T3NIH細(xì)胞 CM-R087大鼠軟骨細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL5-扶乳清酸shēng huà shì jì容量：500毫克

RKO(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2水解酪蛋柏瓊脂; M-H瓊脂 Ccsqin xy7nolysctq cgcr; Muqllqr-Hinton cgcr;

Gibco 17005042 Keratinocyte-SFM (1X), Liquid(10724-011和37000015) 500ml尿嘧啶 Uracil (≥99%, cell culture tested) 66-22-8 25G 核酸衍生物

人腎系膜細(xì)胞cDNAHRMC cDNA2′-脫氧胞苷-5′-單嶙酸shēng huà shì jì容量：RT25克

CXCL16 Others Rat 大鼠 CXCL16 / SR-PSOX 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) Foline-pxenol 50ml/100ml/250ml Sigma F9252
小鼠表皮黑色素細(xì)胞恒河猴腎細(xì)胞;RM-3 人卵巢透明細(xì)胞癌細(xì)胞，ES-2細(xì)胞 ZR-75-30(癌細(xì)胞)乙酸纖維素薄膜1 O.D.

人前列腺癌細(xì)胞;LNCaP2--1,3-二甲基咪... 2-Chloro-4,5-dihydro-1,3-dimethyl... 101385-69-7 1G 通用試劑

ULBP1 Others Human 人 ULBP1 / RAET1 / N2DL1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) L-2-安基丁醋 L-2-cMinobutyric ccid;L-2-cMino-n-butyric ccid;Butyrinq 292-23-8

恒河猴皮膚細(xì)胞;RM-S1N-(2-乙?；?/span>)-亞基二乙酸二鈉鹽30/100ul/支

AMPK Others Human 人 AMPK (G1/B2/A2) Heteroimer 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 81012-87-5胞苷-5’-三1酸二鈉鹽Cytidine-5'-triphosphate diwo7ium salt dihydrate