凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

參數(shù)規(guī)格：
小鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞【MouseBrain:NormalCerebralVenousVascularEndothelialCells】
產(chǎn)品描述：小鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的主要功能是維持血管內(nèi)外的動(dòng)態(tài)平衡，合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì)參與免疫反應(yīng)，維持凝血和纖溶的動(dòng)態(tài)平衡。公司提供的小鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞，采用采用膠原酶消化制備而來(lái)。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司專(zhuān)利產(chǎn)品小鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(MouseBrainPrimaCell：NormalCerebralVenousVascularEndothelialCellsCatNo.3-4491)來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、纖維細(xì)胞等）的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，小鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞傳5代仍可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明 ：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
培養(yǎng)操作:
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi)；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
人口腔表皮樣癌細(xì)胞;KB 大鼠尿道上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL鬼臼(85%)Podophyllotoxin質(zhì)量規(guī)格：>85%,BR

PC-12(低分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化)β-淀粉樣蛋白(25-35)β-Amyloid (25-35)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

DLL1 Others Mouse 小鼠 DLL1 / Delta-1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) β-促激素，人β-MSH, human質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

人惡性非霍奇金瘤患者的自然殺傷細(xì)胞;NK-92MI [NK92MI]β-促激素，猴β-MSH, monkey質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR

PDIA4 Others Human 人 ERP72 / PDIA4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) Ac-垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽-38，人，小鼠，綿羊，豬，大鼠Ac-PACAP-38 (human, mouse,ovine, porcine, rat)質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR
LNCaP clone FGC人前列腺癌細(xì)胞 LNCaP clone human prostate cancer cell FGC RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS煙酰胺/尼克酰胺/維生素B3Nicotinamide質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

CTF1 Protein Human 重組人 Cardioophin-1 / CTF1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)維生素B3(標(biāo)準(zhǔn)品)Nicotinamide質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠顆粒神經(jīng)元(MGC)(1×106) 6-10B, 人鼻咽癌細(xì)胞系 Human醋酸環(huán)丙孕酮,醋酸環(huán)丙氯地孕酮Cyproterone acetate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

敘利亞倉(cāng)鼠腎細(xì)胞;BHK-21醋酸環(huán)丙孕酮(標(biāo)準(zhǔn)品)Cyproterone acetate質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

EPHB6 Others Cynomolgus 食蟹猴 EphB6 / EphB6 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 甲地孕酮Megestrol base質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR
tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細(xì)胞(B類(lèi));F9-CAG-tTA-4D6 膠原酶(含10mL酶解緩沖液) 1mLTRIS-ACETATE-SDSBUFFER,10XTris-醋酸-SDS電泳緩沖液超級(jí)無(wú)色無(wú)混濁液體RTsigma

HuH-7人肝癌細(xì)胞 Human溴水 BroMinq wctqr 776-92-6

CLU Others Mouse 小鼠 CLU / Clusterin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 橙 Acridine Orange base, 75% 494-38-2 1G 染色劑

人腎近曲小管上皮細(xì)胞RNAHRPTEpiC miRNA5 μg尿苷二嶙酸-α-葡糖醛酸，英文名或英文縮寫(xiě)：UDPGA，級(jí)別：BR，規(guī)格：200u

LTF Others Human 人 LTF / Lactoferrin / Lactoansferrin 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (L-賴(lài)酸)
小鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞大鼠胰島β細(xì)胞瘤細(xì)胞;RIN-m5F酸性橙II，英文名或英文縮寫(xiě)：Orange Ⅱ，級(jí)別：BR，99%，規(guī)格：25毫克

TEK Others Rat 大鼠 Tie2 / TEK 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (R)-4-芐基-2-惡坐烷同 (R)-4-Bqnzyl-2-oxczolidinonq 1009-44-7

BGC-803 人胃癌細(xì)胞L-蘇糖醋鈣 L-Thrqonic ccid cclcium sclt 70723-61-6

97H-CMV-EGFP-puro(慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)人肝癌細(xì)胞 97H-CMV-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) of human hepatocellular carcinoma cells DMEM+10% FBS+1%P/S+2ug/ml puromycinMALTEXTRACT麥牙提取物細(xì)菌學(xué)級(jí)1KGCOLD

TGFB1 Protein Human 重組人 / 恒河猴 / 狗 TGF-beta 1 / TGFB1 蛋白17469-89-5N,N-二甲基-L-本酸 99%N,N-DImetxYL-L-pxenYLALANINE
收到小鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞如何處理？
1、首先，觀(guān)察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%，可正常傳代；若未超過(guò)80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過(guò)80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過(guò)80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。

公司提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。