細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

小鼠腦膜成纖維細(xì)胞【MouseBrain:NormalBrainMeningealFibroblasts】
產(chǎn)品描述：小鼠腦膜成纖維細(xì)胞是結(jié)締組織中最常見的一種細(xì)胞，主要功能是在組織創(chuàng)傷后修復(fù)組織。公司提供的小鼠腦膜成纖維細(xì)胞，采用膠原酶消化制備而來。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司專利產(chǎn)品小鼠腦膜成纖維細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(MouseBrainPrimaCell:NormalBrainMeningealFibroblastsCatNo.3-4477)來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞等）的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，小鼠腦膜成纖維細(xì)胞可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
注意事項(xiàng)：
1. 接收到小鼠腦膜成纖維細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
人脈絡(luò)膜血管細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL保泰（標(biāo)準(zhǔn)品）phenylbutazone質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品

CHL細(xì)胞，中國倉鼠肺細(xì)胞 NIH/3T3(胚胎成纖維細(xì)胞) 小鼠腎足細(xì)胞;Mouse podocyte保泰鈣phenylbutazone Calcium質(zhì)量規(guī)格：>98%

CSF3 Protein Human 重組人 G-CSF / CSF3 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)保泰鈉phenylbutazone 質(zhì)量規(guī)格：>98%

TSCCa(人舌鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞;P815吡非尼酮，哌非尼酮Pirfenidone質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

人肝臟星形細(xì)胞裂解物HHSteCL吡非尼酮,哌非尼酮(標(biāo)準(zhǔn)品)Pirfenidone質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)鹽酸頭孢卡品酯Cefcapene pivoxil HCl質(zhì)量規(guī)格：JP;722~764μg/mg

人少突膠質(zhì)細(xì)胞 人肺癌細(xì)胞，SK-MES-1細(xì)胞 P3X63Ag8.653(骨髓瘤細(xì)胞)依托紅霉素Erythromycin Estolate質(zhì)量規(guī)格：USP,干品含量>600 μg/mg

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;Caco-2依托紅霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)Erythromycin Estolate質(zhì)量規(guī)格：含量測定

SERPINA11 Others Mouse 小鼠 SERPINA11 / Serpina11 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 2，6-二氯靛酚鈉(DCIP)2,6-Dichloroindophenol,  salt hydrate(DCIP)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

雜交瘤(B類);C3110D2E11非諾洛芬鈣Fenoprofen Calcium質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR
P4HB Others Mouse 小鼠 P4HB / ERBA2L 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) γ-L-谷酰-β-奈酰胺100克

人絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞HVT正丁基硫代1酰三胺 N-(n-Butyl)-phoric triamide,97% 94317-64-3 5G 通用試劑

ALCAM Others Rat 大鼠 ALCAM / CD166 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鱗醋 litxium phosphctq 10377-2-3

大鼠腸粘膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL錄甲基樹脂25克RT

A-375人惡性色素瘤細(xì)胞 A-375 human maligna melanoma cells DMEM+10% FBSPH緩沖液NA
小鼠腦膜成纖維細(xì)胞SkMC-c 人骨骼肌細(xì)胞(SkMC) 500,000cells 心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)DAPIDAPI染色液100克BR，98%

肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)β-甘油鱗醋二內(nèi)鹽五水 BqTc-GLYCqROL PHOSPHcTq DIwo7ium ScLT 13408-09-8

IFITM3 Others Human 人 IFITM3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 蘇木素 Hematoxylin (certified by the Biologic... 517-28-2 5G 染色劑

大鼠真皮成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLCerium(III)fluoride三扶化鈰25克CP，40%

786-O人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞 786-O human renal clear cell adenocarcinoma cells 1640+10% FBS(L-蘇酸)