細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

小鼠淋巴成纖維細(xì)胞【MouseLymphoid：NormalLymphoidFibroblastCells】
產(chǎn)品描述：小鼠淋巴成纖維細(xì)胞分離自正常小鼠淋巴節(jié)，成纖維細(xì)胞是胚胎中胚層起源的間葉細(xì)胞。它們被廣泛地用于細(xì)胞和分子方面的研究。這主要是因?yàn)槔w維原細(xì)胞是體外培養(yǎng)中最容易生長的一類細(xì)胞，它們的耐久力使它們能夠用于基因轉(zhuǎn)染、顯微注射等多種操作。有確鑿的證據(jù)表明，在身體不同的部分的成纖維細(xì)胞有顯著的不同。組織中的成纖維細(xì)胞暴露在動(dòng)態(tài)的機(jī)械環(huán)境中將影響健康的和正在愈合的軟組織的結(jié)構(gòu)完整性。纖維原細(xì)胞分泌富含I和，或III型膠原的細(xì)胞外基質(zhì)。另外，有報(bào)道指出在淋巴增生疾病中脾臟成纖維細(xì)胞大量增長。公司提供的小鼠淋巴成纖維細(xì)胞，采用膠原酶消化制備而來。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司專利產(chǎn)品小鼠淋巴成纖維細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(MouseLymphoidPrimaCell:NormalLymphoidFibroblastCellsCatNo.3-4365)來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，小鼠淋巴成纖維細(xì)胞傳10代以上仍可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
注意事項(xiàng)：
1. 接收到小鼠淋巴成纖維細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
人胚肺細(xì)胞VA13細(xì)胞;WI-38 VA13亞系2RATPCKTPCK質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR

大鼠腎小球系膜細(xì)胞;HBZY-1 結(jié)腸腺癌細(xì)胞，LS 174T細(xì)胞 RPC細(xì)胞，大鼠垂體細(xì)胞L-苯甘氨酸甲酯鹽酸鹽(s)-2-phenylglycine methyl ester hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：0.98

CNE1, 人鼻咽癌細(xì)胞系 HumanD-丙氨酸乙酯鹽酸鹽H-D-Ala-OEt·HCl質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR

CD180 Others Mouse 小鼠 CD180 / RP105 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 利格列汀;利拉利汀Linagliptin質(zhì)量規(guī)格：>99%,二肽肽酶-4(DPP-4)抑制劑

前脂肪細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)L-谷氨酸-α-芐酯L-Glutamic Acid 1-Benzyl Ester質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
U266B1 [U266], 人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞脫氟帕羅西汀鹽酸鹽Defluoro Paroxetine, Hydrochloride

人導(dǎo)管瘤細(xì)胞;BT-474 大鼠腎動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL帕羅西汀馬來酸鹽Paroxetine maleate

MFC 小鼠胃癌細(xì)胞4-羥基-2H-1,2-苯并噻嗪-3-羧酸乙酯 1,1-二氧化物4-Hydroxy-2H-1,2-benzothiazine-3-carboxylic acid ethyl ester 1,1-Dioxide

IL21R Others Human 人 IL-21R / Ierleukin-21 Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 甲基4-羥基-2H-1,2-苯并噻嗪-3-羧酸鹽 1,1-二氧化物Methyl 4-Hydroxy-2H-1,2-benzothiazine-3-carboxylate 1,1-Dioxide

小鼠腦瘤細(xì)胞;BC3H1去甲基吡羅昔康(吡羅昔康雜質(zhì)B)Desmethyl Piroxicam (Piroxicam Impurity B)
SUP-B15(人Ph+急淋白血病細(xì)胞系) 5×106cells/瓶×2分子篩13X型100U2～8℃

Hepa 1-6(小鼠肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0458U-118 MG(人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤)5×106cells/瓶×2 人胎兒胸腺細(xì)胞株;HFT-8810 [HFT8810]2，4，5-三拂本加醋 2,4,5-Trifluorobqnzoic ccid 446-17-3

人卵巢畸胎瘤細(xì)胞;PA-1礦物油100毫克

NCAM1 Others Rat 大鼠 NCAM1 / CD56 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 硅藻土載體1克2～8℃

CL-0433RWPE-2(人前列腺正常細(xì)胞)5×106cells/瓶×22409-55-42-叔丁基對(duì)2-tert-Butyl-4-metxylpxenol
小鼠淋巴成纖維細(xì)胞NCI-H661(人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 腎上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)2′-脫氧肌苷-5′-三嶙酸三鈉鹽shēng huà shì jì容量：5克

成骨細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)十五醇 1-Pentadecanol,99% 629-76-5 1G 通用試劑

TF Others Rat 大鼠 ansferrin / TF 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 石墨分;;筆 Grcphitq powdqr;Blcck lqcd;Minqrcl ccrbon 778-4-2

人腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞;SW-13Heparinwo7iumsalt肝嶙脂鈉鹽1克BR，1500-3000u/mg

貓?jiān)醇?xì)胞 SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞，COS-1細(xì)胞 AtT-20細(xì)胞，小鼠垂體瘤細(xì)胞(分泌促生長激素分泌激素)7446-8-4兒仰化硒Selenium dioxide