凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

參數(shù)規(guī)格：
小鼠膀胱成纖維細(xì)胞【MouseBladder:NormalBladderFibroblasts】
產(chǎn)品描述：小鼠膀胱成纖維細(xì)胞分離自正常小鼠膀胱組織，膀胱成纖維細(xì)胞分泌的生長因子是一種具有多功能的促有絲分裂原，研究已表明其參與惡性腫瘤的形成過程。近年來，堿性成纖維細(xì)胞生長因子在膀胱癌發(fā)病過程中的作用、與生物學(xué)行為之間的關(guān)系以及治療上的應(yīng)用已受到重視。公司提供的小鼠膀胱成纖維細(xì)胞，采用膠原酶消化制備而來。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司專利產(chǎn)品小鼠膀胱成纖維細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒（MouseBladderPrimaCell:NormalBladderFibroblastsCatNo.3-4239)來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，小鼠膀胱成纖維細(xì)胞傳10代以上仍可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明 ：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
培養(yǎng)操作:
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
人色素瘤細(xì)胞;A875蓖麻油酸甲酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Methyl ricinoleate質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99%(GC)

IL18RAP Others Cynomolgus 食蟹猴 IL18RAP 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 山崳酸甲酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Methyl behenate質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

人肝竇內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL二十四烷酸甲酯（標(biāo)準(zhǔn)品）Methyl tetracosanoate質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

LLC細(xì)胞，小鼠肺癌細(xì)胞 CHO(中國倉鼠卵巢細(xì)胞) 恒河猴肺細(xì)胞;RM-L1芥酸甲酯（標(biāo)準(zhǔn)品） Methyl cis-13-docosenoate質(zhì)量規(guī)格：>90.0%(GC)

PPBP Protein Rat 重組大鼠 NAP-2 / PPBP / CXCL7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)十九酸（標(biāo)準(zhǔn)品）Nonadecanoic Acid質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5% (GC)
正常大鼠腎細(xì)胞;NRK-52E依替米星（標(biāo)準(zhǔn)品）Etimicin質(zhì)量規(guī)格：效價(jià)測定

CN3 Others Rat 大鼠 Coactin 3 / CN3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 巴龍霉素（標(biāo)準(zhǔn)品）Paromomycin質(zhì)量規(guī)格：效價(jià)測定

人成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL拉寧（標(biāo)準(zhǔn)品）Teicoplanin 質(zhì)量規(guī)格：效價(jià)測定

T6細(xì)胞，人舌癌細(xì)胞 甲型副傷寒沙門氏菌 大鼠肝細(xì)胞瘤;H-4-II-E制霉菌素（標(biāo)準(zhǔn)品）Nystatin質(zhì)量規(guī)格：效價(jià)測定

CXCL14 Protein Human 重組人 CXCL14 / BRAK 蛋白肌苷5'-單1酸Inosine 5'-Monophosphate(IMP)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
兔眼Tenon's囊成纖維細(xì)胞;RYTF銅100克

中國倉鼠卵巢細(xì)胞K1(亞系克隆);CHO-K1 腺癌細(xì)胞，SK-BR-3細(xì)胞 RK-13細(xì)胞，兔腎細(xì)胞系膽 (-20℃) Cholqstqrol 27-88-2

SGC-7901, 人胃腺癌細(xì)胞系 Human代乙酰胺 Iodoacetamide (≥99%, crystalline) 144-48-9 5G 通用試劑

CPB2 Others Human 人 CPB2 / Carboxypeptidase-B2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 總基酸測試盒個(gè)RT

人表皮角質(zhì)細(xì)胞-裂解物HEK-a L(脫氧核糖核酸酶)
小鼠膀胱成纖維細(xì)胞THP-1人單核白血病細(xì)胞 低分化結(jié)腸腺癌細(xì)胞,HCT-116細(xì)胞 SK-MES-1(肺鱗癌細(xì)胞)BRADFORDREAGENTBRADFORD試劑蛋白組學(xué)級透明藍(lán)色液體COLDsigma

小鼠源細(xì)胞1,3-二溴-5,5-二基內(nèi)酰脲 1,3-Dibromo-5,5-dimqthylhydcntoin 77-48-2

HA Others H7N7 甲型流感 H7N7 (A/chicken/Netherlands/1/03) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 紅色典化共(劇讀) MqRCURY(II) IODIDq 7774-9-0

狗腎惡性組織細(xì)胞增生癥細(xì)胞;DH822-脫氧-D-赤戊糖，英文名或英文縮寫：2-Deoxy-D-Ribose，級別：BR，90%，規(guī)格：500U

COL4A3 Others Rat 大鼠 COL4A3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 1077-28-7DL-硫辛酸;DL-α-硫辛酸;1,2-二硫戊環(huán)-3-戊酸;DL-6,8-二硫代辛酸;α-硫脂酸;二硫辛酸DL-Thioctic acid;1,2-Dithio lane-3-valeric acid; 1,2-Dithiolane-3-pentanoic acid; DL-α-Lipoic acid; α-Lipoic acid; 5-(1,2-Dithiolan-3-yl)valeric acid; 5-[3-(1,2-Dithiolanyl)]pentanoic acid;δ-[3-(1,2-Dithiacyclopentyl)]pentanoic acid; DL-6,8-Dithiooctanoic
收到小鼠膀胱成纖維細(xì)胞如何處理？
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。

公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。