細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

小鼠心肌細(xì)胞（乳鼠）【MouseCardiac:NormalMyocardialCells】
產(chǎn)品描述：心肌細(xì)胞構(gòu)成心壁的主要成分。為心臟博動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。心肌細(xì)胞根據(jù)其生理功能可分為兩類,即工作性心肌細(xì)胞和傳導(dǎo)性心肌細(xì)胞。其中工作性心肌細(xì)胞構(gòu)成心房肌和心室肌,是心壁的主要組成部分,具有興奮、傳導(dǎo)和收縮的功能;而自律性心肌細(xì)胞組成心臟的傳導(dǎo)系統(tǒng),包括竇房結(jié)、結(jié)間束、房室交界、左右束支和普肯耶纖維網(wǎng)。它們除有興奮、傳導(dǎo)的功能外,還有自律性,即不受神經(jīng)支配與體液的影響,有產(chǎn)生周期性興奮的能力。竇房結(jié)興奮,將沖動(dòng)擴(kuò)布到心肌,引起心肌的收縮,從而產(chǎn)生心肌細(xì)胞的生物電現(xiàn)象。所以心肌細(xì)胞具有興奮性、自律性、傳導(dǎo)性和收縮性四種生理特性。公司提供的小鼠心肌細(xì)胞（乳鼠），采用膠原酶消化制備而來(lái)。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司專利產(chǎn)品小鼠心肌細(xì)胞（乳鼠）培養(yǎng)試劑盒(MouseCardiacPrimaCell:NormalMyocardialCellsCatNo.3-4211)來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、纖維細(xì)胞等）的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，小鼠心肌細(xì)胞（乳鼠）可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
公司提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
注意事項(xiàng)：
1. 接收到小鼠心肌細(xì)胞（乳鼠），肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
人胎盤(pán)絨毛膜細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLN-氧基奧氮平Olanzapine N-Oxide

MA-891細(xì)胞，小鼠癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞 L929(成纖維細(xì)胞) 人葡萄膜色素細(xì)胞;UM氨曲南Aztreonam質(zhì)量規(guī)格：> 95%,BR

CCL7 Protein Human 重組人 MCP-3 / CCL7 蛋白 (His 標(biāo)簽)氨曲南（標(biāo)準(zhǔn)品）Aztreonam質(zhì)量規(guī)格：HPLC>95%,標(biāo)準(zhǔn)品

RH-35(大鼠肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H7N8 (A/mallard/Netherlands/33/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 巴卡丁 IIIBaccatin III質(zhì)量規(guī)格：度> 98%,BR，可用于細(xì)胞培養(yǎng)

人肺轉(zhuǎn)化細(xì)胞;AE1201巴卡丁 III（標(biāo)準(zhǔn)品）Baccatin III質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY0920鹽酸洛美沙星Lomefloxacin HCl質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR

293FT細(xì)胞，表達(dá)SV40T抗原人胚腎上皮細(xì)胞 大鼠肝細(xì)胞瘤,H4-II-E-C3細(xì)胞 CL-0324BT-20(人癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2鹽酸洛美沙星（標(biāo)準(zhǔn)品）Lomefloxacin HCl質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

BC-009(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2氯替潑諾Loteprednol Etabonate質(zhì)量規(guī)格：>99.0%

HTEpC-c 人類氣管上皮細(xì)胞(HTEpC) 500,000cells 人腦血管平滑肌細(xì)胞HBVSMC氯替潑諾(標(biāo)準(zhǔn)品)Loteprednol Etabonate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99.0%,標(biāo)準(zhǔn)品

原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝：5/2.5/1ml洛伐他汀Lovastatin,Monacolin K質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
AGRP Others Mouse 小鼠 AGRP / AgRP 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) X-SA瓊脂培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：RT1把/包

MEG-01 人成巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞偶氮錄膦mN;2-(4-錄-2-膦醋基本偶氮)-7-(3-肖基本偶氮)-1,8-二羌基-3,6-二磺醋 Chlorophosphonczo MN 77320-04-0

MSTO-211H人肺癌細(xì)胞株 Human lung cancer cell line MSTO-211H RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS (50%) Glutaraldehyde solution (Grade I, 50% ...  10ML 通用試劑

MIF Protein Human 重組人 MIF / GLIF 蛋白 (His 標(biāo)簽)L-天門(mén)冬酸鉀shēng huà shì jì容量：RT25克

人胚肺成纖維細(xì)胞;WI-38 [WI38] 人支氣管成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL(二硫代蘇糖醇)
小鼠心肌細(xì)胞（乳鼠）DDR1 Others Human 人 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) DL-Malicacid蘋(píng)果酸1毫克CP，99%

非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2固綠 FCF brillicnt bluq G 323-42-9

IL4 Others Mouse 小鼠 IL4 / Ierleukin-4 (Q136D,Y139D) 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 羅丹明 B Rhodamine B (Dye content, ≥95%) 81-88-9 25G 染色劑

心肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 ×105方(1ml)Cyclooctane環(huán)辛酮25克BR，97%

獼猴肌肉細(xì)胞;MMm7 人結(jié)腸癌細(xì)胞，HT-29細(xì)胞 Bcap-37(癌細(xì)胞)(蛋酸))