細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

小鼠小腸上皮細(xì)胞【MouseIntestine:NormalIntestinalMucosaEpithelialCells】
產(chǎn)品描述：腸上皮細(xì)胞是機(jī)體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障，持續(xù)暴露于大量抗原中，也是機(jī)體面對病原微生物的第一道防線。因此，IECs除有吸收、分泌和等重要生理功能之外，在粘膜先天性和獲得性免疫防御機(jī)制中也起著重要作用。小腸上皮細(xì)胞作為首先接觸抗原的細(xì)胞，在粘膜免疫反應(yīng)的起始階段發(fā)揮關(guān)鍵作用，它決定粘膜免疫反應(yīng)的發(fā)生、性質(zhì)和強(qiáng)度。公司提供的小鼠腸上皮細(xì)胞，均來自新鮮組織。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司產(chǎn)品小鼠腸上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(MouseIntestinePrimaCell:NormalIntestinalMucosaEpithelialCellsCatNo.3-4099)來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、纖維細(xì)胞等）的污染，同時質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，小鼠腸上皮細(xì)胞可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
注意事項：
1. 接收到小鼠小腸上皮細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精（建議配置75%的酒精的水是過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

以下是公司正在的產(chǎn)品：
人羊膜上皮細(xì)胞去甲基羥基西立伐他汀鈉鹽Desmethyl Hydroxy Cerivastatin  Salt

人正常前列腺基質(zhì)永生化細(xì)胞;WPMY-1 人心肌成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL氨芬酸鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)Amfenac 質(zhì)量規(guī)格：含量測定

人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞RNAHPMEC miRNA5 μg地塞米環(huán)氧水解物8DM質(zhì)量規(guī)格：>98%

CD33 Others Human 人 CD33 / Siglec-3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 甲基潑尼Meprednisone質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

豬腎傳代細(xì)胞;IBRS-2甲基潑尼(標(biāo)準(zhǔn)品)Meprednisone質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞;HK-2鹽酸克林霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)Clindamycin HCl質(zhì)量規(guī)格：>800μg/mg,含量測定

HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸維拉帕米Verapamil HCl質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP32,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)

原代肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞特制基礎(chǔ)無血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100ml鹽酸維拉帕米（標(biāo)準(zhǔn)品）Verapamil HCl質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

RK1 Others Rat 大鼠 kA / RK1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 霉酚酸; 麥考酚酸;MPAMycophenolic acid質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

EB轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KMY0904霉酚酸; 麥考酚酸（標(biāo)準(zhǔn)品）Mycophenolic acid質(zhì)量規(guī)格：HPLC>97%,標(biāo)準(zhǔn)品
CM-H059人子宮頸上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL1-nitnoso-2-naphtholα-亞硝基-β-奈酚100毫克IND

SGC-7901, 人胃腺癌細(xì)胞系1,1,2,2-氘代四錄烷 1,1,2,2-TqTRcCHLOROqTHcNq-D2 33682-24-0

人胰腺癌細(xì)胞;PANC-1 人角膜內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL麥芽糖醇 Mcltitol; 282-88-6

人神經(jīng)束膜細(xì)胞cDNAHPC cDNAFmoc-Arg(Pbf)-OHFmoc-Pbf-精酸500克BR，98%

TIGIT Others Mouse 小鼠 TIGIT / VSTM3 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 二異胺punum》98.0%Diisopropanolamine
小鼠小腸上皮細(xì)胞SEMA4D Others Rat 大鼠 Semaphorin 4D / SEMA4D / CD100 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) L-精酸乙酯鹽酸鹽，英文名或英文縮寫：L-Arginine etxyl ester dixy7nochloride，級別：BR，98.5%，規(guī)格：5克

人肺動脈成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL1,2:5,6-二-o-環(huán)亞己基-d-甘露醇 1,2:5,6-DI-O-CYCLOHqXYLIDqNq-D-McNNITOL 76779-67-4

M619細(xì)胞，人侵襲性脈絡(luò)膜色素瘤細(xì)胞 產(chǎn)氣莢膜梭菌 人T細(xì)胞白血病細(xì)胞;HuT 78鉬醋 Molybdic ccid 778-91-4

ANGPTL4 Protein Human 重組人 ANGPTL4 蛋白 (His 標(biāo)簽)月桂基基錄化，英文名或英文縮寫：DTAC，級別：高，60%，規(guī)格：25克

KU812(人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) EE肉湯NA