凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

參數(shù)規(guī)格：
小鼠支氣管成纖維細胞【MouseAirway:NormalBronchialFibroblasts】
產品描述：小鼠支氣管成纖維細胞分離自正常小鼠支氣管組織，呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。成纖維細胞是結締組織中最常見的一種細胞。可在支氣管創(chuàng)傷后修復組織。公司提供的小鼠支氣管成纖維細胞，均來自新鮮組織。細胞的培養(yǎng)采用公司專利產品小鼠支氣管成纖維細胞培養(yǎng)試劑盒(MouseAirwayPrimaCell:NormalBronchialFibroblastsCatNo.3-4078)來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質量的穩(wěn)定。在公司技術部標準的操作流程下，小鼠支氣管成纖維細胞可以保持原代細胞的分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調節(jié)特定基因的遺傳功能。

實驗要點及說明 ：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率； 
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
培養(yǎng)操作:
1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
色素細胞培養(yǎng)基-2(不含TPA)MelM-2dUMP;2'-脫氧尿苷-5'-1酸二鈉鹽dUMP, 2'-Deoxyuridine-5'-monophosphate, di salt質量規(guī)格：>98%,BR

FKBP7 Others Human 人 PPIase / FKBP7 人細胞裂解液 (陽性對照) 3-吲哚基-beta-D-吡喃葡萄糖苷(>98%,BR)Indoxyl-Glucoside質量規(guī)格：>98%,BR

大鼠胰腺導管上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL2-嘌呤2-Mercaptopurine

NCI-H266人非小細胞肺癌細胞 NCI-H266 cells in human non small cell lung cancer 1640+10%FBS2',3'-O-異亞丙級-6-核苷嘌呤2',3'-O-Isopropylidene-6-mercaptopurine riboside

NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標簽)2-氨基-6-羥基-8-嘌呤2-Amino-6-hydroxy-8-mercaptopurine
少突膠質細胞培養(yǎng)基OM-prf芹糖甘草苷；甘草苷元-7-O-D-芹糖-4’-O-D-葡萄糖苷Liquiritin apioside質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

PROM1 Others Rat 大鼠 CD133 / PROM1 / Prominin 1 人細胞裂解液 (陽性對照) 芹糖異甘草苷；異甘草苷芹糖Isoliquiritin apioside質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

Sars結構蛋白表達株;293sars181A白屈菜紅堿(標準品）Chelerythrine質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

CNE1-lmp\l細胞，轉基因鼻咽癌細胞系 小鼠色素瘤細胞,B16F1細胞 CM-H023人甲狀腺濾泡上皮細胞完全培養(yǎng)基100mLTAE684NVP-TAE684質量規(guī)格：>98%,選擇性的ALK抑制劑

NIH/3T3(小鼠胚胎細胞) 5×106cells/瓶×2青蒿酸(標準品)Artemisic acid質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品
人小細胞肺癌;NCI-H2227依諾沙星(標準品）質量規(guī)格：含量測定Enoxacin

CD3D & CD3E Others Mouse 小鼠 CD3D & CD3E Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照) [Nle4,DPhe7] a-促激素酰胺; 美拉諾坦 I質量規(guī)格：>95%,BR[Nle4,DPhe7] a-MSH, amide; Melanotan I

COC1 人卵巢癌細胞[Nle8’18,Tyr34]-甲狀旁腺激素(1-34) 酰胺 (牛)質量規(guī)格：>95%,BR[Nle8’18,Tyr34]-pTH (1-34) amide (bovine)

AsPC-1人轉移胰腺腺癌細胞 AsPC-1 human metastatic pancreatic adenocarcinoma cells 1640+10% Hyclone滅活血清[Nle8’18,Tyr34]-甲狀旁腺激素(3-34) 酰胺(牛)質量規(guī)格：>95%,BR[Nle8’18,Tyr34]-pTH (3-34) amide (bovine)

TNFSF11 Protein Human 重組人 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 蛋白 (Fc 標簽)2-氨基咪唑硫酸鹽 質量規(guī)格：>98%2-Aminoimidazole hemisulfate
小鼠支氣管成纖維細胞CRL-2780細胞，人結腸癌細胞 人骨髓瘤細胞,3T3D細胞 人惡性非霍奇金瘤患者的自然殺傷細胞;NK-92 [NK92]乳酸脫氫酶(兔肌)5克

WB-F344(大鼠肝上皮樣干細胞) 5×106cells/瓶×26-溴乙酸 6-Bromohexanoic acid,97% 4224-70-8 5G 通用試劑

BMPR2 Others Human 人 BMPR-II 人細胞裂解液 (陽性對照) 雙(三基硅基)安 litxium bis(trimqthylsilyl)cmidq 4039/3/1

EB病毒轉化的人B細胞;KMY0919三扶乙醇，英文名或英文縮寫：TFEA，級別：CP，98%，規(guī)格：25克

人臍帶靜脈平滑肌細胞 (HUVSMC)( 5×105 )NutrientBroth 100g/500g/北京250g BD 233000
收到小鼠支氣管成纖維細胞如何處理？
1、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài)、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作。

公司提供的原代細胞均來自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件，以降低雜細胞的污染，同時保證質量的穩(wěn)定。在公司生物技術部標準的操作流程下，原代細胞可以保持分化狀態(tài)，進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調節(jié)特定基因的遺傳功能。