凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

參數(shù)規(guī)格：
小鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞【MouseLung:NormalVeinEndothelialCells】
產(chǎn)品描述：小鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞分離自正常小鼠肺組織，呈多邊形鵝卵石狀排列。該細(xì)胞在維持血管內(nèi)外的動(dòng)態(tài)平衡，合成和分泌細(xì)胞因子和介質(zhì)，維持凝血和纖溶的動(dòng)態(tài)平衡中起重要作用。公司提供的小鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，均來(lái)自新鮮組織。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司專利產(chǎn)品小鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(MouseLungPrimaCell:NormalVeinEndothelialCellsCatNo.3-4071)來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、纖維細(xì)胞等）的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，小鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明 ：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
培養(yǎng)操作:
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)纖維素酶(酶活>45 U/mg)Cellulase質(zhì)量規(guī)格：酶活>45 U/mg，BC

3T6swiss細(xì)胞，小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 人癌細(xì)胞,M453細(xì)胞 谷胱甘肽過氧化物酶分析試劑盒GPXDL-脯氨酸DL-Proline質(zhì)量規(guī)格：0.99

SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞;COS-1DL-丙氨酸甲酯鹽酸鹽DL-Alanine methyl ester hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：0.98

IL13RA2 Others Human 人 IL13RA2 / IL13R 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) L-谷氨酸5乙酯H-Glu(OEt)-OH質(zhì)量規(guī)格：0.985

牛腎細(xì)胞;MDBK(NBL-1)N-乙酰-DL-亮氨酸N-Acetyl-DL-leucine 質(zhì)量規(guī)格：0.98
原代內(nèi)皮細(xì)胞特制無(wú)血清添加劑Many types of cells包裝：1ml銅片Copper sheet質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,厚度0.1-0.2cm

HT1080細(xì)胞，纖維肉瘤細(xì)胞 細(xì)胞,HCE1細(xì)胞 人表皮色素細(xì)胞-中色素總RNAHEM-m NA氯化亞銅(>97%,BR)Copper(I) chloride質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR

非洲綠猴腎細(xì)胞系/IgRCD4+;VERO/IgRCD4+化亞銅(>99%,BR)Copper (I) iodide質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

FGFR4 Others Human 人 FGFR4 / FGF Receptor 4 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 2'-脫氧鳥苷5'二1酸二鈉鹽dGDP, 2'-Deoxyguanosine-5'-Diphosphate di salt質(zhì)量規(guī)格：>97%，分子生物學(xué)級(jí)

小鼠肺腺癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過表達(dá));LA1-VAP33-GFPD-葡萄糖醛酸鈉(> 98%，BR)D-Glucuronic acid,  salt, monohydrate質(zhì)量規(guī)格：> 98%，BR
V79(倉(cāng)鼠肺細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠前胃癌細(xì)胞;MFC過氧化物酶(辣根)shēng huà shì jì容量：5克

人成纖維細(xì)胞裂解物HLFL2，3-二溴炳1 2,3-Dibromopropqnq 213-31-2

EDNRB Others Human 人 EDNRB / Endothelin B Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 水合三錄化釕shēng huà shì jì容量：25克

人癌細(xì)胞;MDA-MB-468血清兔抗人γ鏈500克

tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細(xì)胞(B類);P19-CAG-tTA-3C3 彈性蛋白酶(含100mL酶解緩沖液) 10mL73-03-0蟲草素(-20℃)Cordycepin
小鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞JeKo-1(人套細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 IL12A / NKSF1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) wo7iumACETATE,ANxy7noUS醋酸鈉,無(wú)水ACS級(jí),美國(guó)藥典級(jí),食品化學(xué)法典級(jí)白色結(jié)晶RTsigma

白介素-2轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞;JEG-3/VP16-IL-2隊(duì)三拂氧基本異青醋酯 4-(TrifluoroMqthoxy)phqnyl isocycnctq 32037-73-1

人肺間充質(zhì)干細(xì)胞(肺)(HPMSC)(5×105)改良LETHEEN瓊脂基礎(chǔ)25毫升2～8℃

CM-H136人牙周膜成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mLTWEEN20吐溫20試劑級(jí)黃色至琥珀色粘稠液體RTsigma

小鼠瘤細(xì)胞;P388D1(IL-1) 小鼠胃粘膜上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL10466-65-6高錸酸鉀,99% (metals basis), Re 64%potewwium perrhenate
收到小鼠肺大靜脈內(nèi)皮細(xì)胞如何處理？
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)拍照，并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時(shí)，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作。

公司提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。