細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

小鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞【MouseMuscle:NormalSkeletalSatelliteCells】
產(chǎn)品描述：肌衛(wèi)星細(xì)胞指骨骼肌中除骨骼肌纖維（肌細(xì)胞）外的一種扁平、有突起的細(xì)胞。附著于肌纖維（肌細(xì)胞）表面；當(dāng)肌纖維（肌細(xì)胞）受損后，肌衛(wèi)星細(xì)胞可增殖分化，參與肌纖維（肌細(xì)胞）的修復(fù)，因此具有干細(xì)胞性質(zhì)。公司提供的小鼠骨骼肌細(xì)胞，均來(lái)自新鮮組織。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司專(zhuān)利產(chǎn)品小鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(MouseMusclePrimaCell:NormalSkeletalSatelliteCellsCatNo.3-4008)來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、纖維細(xì)胞等）的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，小鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
公司提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
注意事項(xiàng)：
1. 接收到小鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿(mǎn)37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

以下是公司正在熱銷(xiāo)的產(chǎn)品：
小鼠單核巨噬細(xì)胞;J774A.1米諾地爾（硫酸鹽）敏樂(lè)啶(標(biāo)準(zhǔn)品)Minoxidil Sulfate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

IL6R Others Mouse 小鼠 IL6RA / CD126 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) MQAE(氯離子熒光探針)N-(Ethoxycarbonylmethyl)-6-methoxyquinolinium bromide質(zhì)量規(guī)格：進(jìn)分

人T瘤轉(zhuǎn)基因細(xì)胞;Jurkat D,E特立氟胺A771726 (Teriflunomide)質(zhì)量規(guī)格：>99%,二氫乳清酸脫氫酶(DHODH)抑制劑

BCAM Others Mouse 小鼠 BCAM 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 當(dāng)歸酰基戈米辛H(標(biāo)準(zhǔn)品)Angeloylgomisin H質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥96%,標(biāo)準(zhǔn)品

CW-2 人結(jié)腸癌細(xì)胞美曲勃龍(R-1881)Methyltrienolone質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
RKO-E6(人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2四環(huán)素(國(guó)產(chǎn))Tetracycline質(zhì)量規(guī)格：BR,國(guó)產(chǎn)

GBC-SD(人膽囊癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0312293ET(人胚腎細(xì)胞(SV40T和EBNA1基因修飾細(xì)胞))5×106cells/瓶×2 盤(pán)羊皮膚細(xì)胞;ASHS3乙基氫化銅蛋白,鹽酸奧普托欣Ethylhydrocupreine HCl,Optochin HCl質(zhì)量規(guī)格：>97%,美國(guó)進(jìn)口

小鼠腎集合管細(xì)胞(SV40轉(zhuǎn)化);M-1莫西菌素,莫西克汀Moxidectin 質(zhì)量規(guī)格：>90%,BR

16. 細(xì)胞系統(tǒng)莫西菌素,莫西克汀(標(biāo)準(zhǔn)品)Moxidectin 質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定,標(biāo)準(zhǔn)品

CM-M003小鼠Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL氨力農(nóng)Amrinone質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
人EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞;CGM1 人尿道上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mLD-果糖-6-1酸二鈉鹽質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRD-Fructose-6-phosphate di salt

人心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞RNAHCMEC miRNA5 μg白頭翁皂苷B質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Pulchinenoside B

VEGFA Others Human 人 VEGF121b / VEGF-A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 3-O-β-D-葡萄糖( 1→4)-[ a -L-鼠李糖(1→2)]- a-L-阿拉伯糖 23-羥基羽扇豆20(29)-1-28–酸;白頭翁皂苷D質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品V

大額牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-1羅漢果皂苷Iva質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Mogroside IVa

PA319細(xì)胞，人大腸癌細(xì)胞 人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞,D407細(xì)胞 人前列腺癌細(xì)胞;PC-3 [PC3]3A-氨基-3A-脫氧-(2AS,3AS)-β-環(huán)糊精水合物(>97.0%(T))質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)3A-Amino-3A-deoxy-(2AS,3AS)-β-cyclodextrin Hydrate
小鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞CD276 Others Rat 大鼠 B7-H3 / CD276 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 剛果紅試紙shēng huà shì jì容量：100克

腸平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)2,2-二安 2,2'-DIPYRIDYLcMINq 10-34-

Hep3B細(xì)胞，肝癌細(xì)胞 人Hela細(xì)胞耐藥亞株(Hela/DDP),Hela細(xì)胞 人羊膜上皮細(xì)胞cDNAHAmEpiC cDNA三羥甲基基shēng huà shì jì容量：2～8℃1毫克

恒河猴胚腎細(xì)胞;FRhK-4 [FRhK4]對(duì)磺酸乙酯shēng huà shì jì容量：1公斤

CSF3R Others Human 人 CD114 / G-CSFR / GCSFR 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 1132-61-23-嗎啉丙磺酸MOPS