細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

人小腦顆粒細(xì)胞【HumanBrain:NormalCerebellarGranuleCells】
產(chǎn)品描述：顆粒細(xì)胞層在小腦形成的早期分離出來，并只產(chǎn)生顆粒細(xì)胞。小腦顆粒細(xì)胞是腦中數(shù)量最多的神經(jīng)元，公司提供的人小腦顆粒細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)人小腦顆粒細(xì)胞的組織采集于地方醫(yī)院，組織的采集根據(jù)公司批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司專利產(chǎn)品人小腦顆粒細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(HumanBrainPrimaCell:NormalCerebellarGranuleCellsCatNo.3-0477)來優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、纖維細(xì)胞等）的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，人小腦顆粒細(xì)胞傳12代仍可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，公司提供的人源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
注意事項(xiàng)：
1. 接收到人小腦顆粒細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)碳酸鉀無水(>98%，BR)Potassium carbonate, anhydrate質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR

Dami細(xì)胞，人巨核細(xì)胞保白血病細(xì)胞 小鼠網(wǎng)織細(xì)胞肉瘤,M5076細(xì)胞 前列腺上皮細(xì)胞生長(zhǎng)添加物PEpiCGS?；撬?/span>(>98.5%，JP )Taurine質(zhì)量規(guī)格：>98.5%，JP

NCI-H2227(人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×21,5-萘二磺酸二鈉鹽(>97%,BR)Naphthalene-1,5-disulfonic acid di salt質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR

BSC-1(猴腎細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-M062小鼠腎小管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL 人前列腺癌細(xì)胞;PC-3 [PC3]1,5-萘二磺酸四水(>98%,BR)Naphthalene-1,5-disulfonic acid tetrahydrate質(zhì)量規(guī)格：>98%

非洲綠猴腎細(xì)胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2色酚AS醋酸鹽(>98%,BC)Naphthol AS acetate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BC
人APP-PS1(C410Y)雙基因轉(zhuǎn)染細(xì)胞株;7WCY1.0萘夫西林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)Nafcillin  salt monohydrate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠前胃癌低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(綠色熒光蛋白標(biāo)記);MFC-B5-GFP 小鼠晶狀體上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL阿托西班,醋酸阿托西班Atosiban Acetate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

EPC, 大鼠血管內(nèi)皮祖細(xì)胞 Rattus曲格列汀Trelagliptin free base質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

GLA Others Human 人 GLA / Alpha-galactosidase A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 頭孢噻1鈉,噻孢霉素,頭孢霉素,先鋒霉素ICefotaxime 質(zhì)量規(guī)格：Purity>97%,Potency920ug/mg,USP

人真皮內(nèi)皮細(xì)胞裂解物HDLECL頭孢噻1鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)Cefotaxime 質(zhì)量規(guī)格：效價(jià)測(cè)定
Lec1(倉鼠卵巢細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2L-色酸鹽酸鹽shēng huà shì jì容量：RT，避光25克

Promocell C-28015 Mesenchymal Stem CellNeurogenic Differe. Medium, 間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)性分化培養(yǎng)基(即用型) 100ml2′-脫氧胸苷-5′-... Thymidine 5′-monophosphate di s... 33430-62-5 100MG 通用試劑

人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞HCAEC六基鱗酰三安;六鱗安;三(二安基)氧膦 HqxcMqthylphosphorcMidq;HqxcMqthylphosphoric tricMidq;Tris(diMqthylcMino)phosphinq oxidq;HqxcMqtcpol;HqMpc;HMPT;HMPc;qNT-50882; 680-31-9

SERPINE1 Others Rat 大鼠 SerpinE1 / PAI-1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) wo7ium1-pentanesulfonate1-磺酸鈉5克AR，99.9%

非洲綠猴腎細(xì)胞;CV-1874-60-2對(duì)甲基本甲酰錄P-Toluoyl chloride
人小腦顆粒細(xì)胞GFRA2 Others Mouse 小鼠 GFRA2 / GFRα2 / GDNFRB 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 十九烷shēng huà shì jì容量：5克

CM-R085大鼠表皮角化細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL2,6-二錄嘌呤 2,6-Dichloropurinq 2421-40-1

COL9A1 Others Human 人 COL9A1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 人參皂甙Rg1，英文名或英文縮寫：Ginsenoside Rg1，級(jí)別：BR，規(guī)格：500克

小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞MA鹽酸甘酸乙酯，英文名或英文縮寫：Glycine etxyl ester HC1，級(jí)別：BR，98.5%，規(guī)格：10克

BLO-11細(xì)胞，小鼠骨骼成纖維細(xì)胞 人腎癌Wilms細(xì)胞,G401細(xì)胞 人膀胱平滑肌細(xì)胞HBdSMC148-25-4變色酸;變酸;4,5-二羥基-2,7-二磺酸;1,8-二羥基-3,6-二磺酸ChroMotropic acid;1,8-Dixy7noxy-3,6-disulfonic acid