人胰腺上皮細(xì)胞【HumanPancreas:NormalPancreaticEpithelialCells】
產(chǎn)品描述：公司提供的人胰腺上皮細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，用于培養(yǎng)人胰腺上皮細(xì)胞的組織采集于地方醫(yī)院，組織的采集根據(jù)公司批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司專利產(chǎn)品人胰腺上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(HumanPancreaticPrimaCell:NormalPancreaticEpithelialCellsCatNo.3-0456)來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、纖維細(xì)胞等）的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，人胰腺上皮細(xì)胞傳5代以上仍可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
公司提供的原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，公司提供的人源原代細(xì)胞均來(lái)自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來(lái)優(yōu)化目的細(xì)胞生長(zhǎng)條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評(píng)估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項(xiàng)：
1. 接收到人胰腺上皮細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
血小板衍生生長(zhǎng)因子L-絲氨酸L-Serine質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

人肺動(dòng)脈成纖維細(xì)胞 (HPAF)( 5×105 ) RLFs, 大鼠肺成纖維細(xì)胞 RattusL-抗壞血酸鈉 L-ascorbate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

犬腎細(xì)胞;MDCK/IgR焦1酸鈉(AR) pyrophosphate質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR

FAM3D Others Mouse 小鼠 FAM3D / Oit1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 碳酸氫銨(AR)Ammonium bicarbonate質(zhì)量規(guī)格：AR

人前列腺上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL氯化銨(AR)Ammonium chloride質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,AR
CCL21 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CCL21 / 6Ckine 蛋白瑞舒伐他汀/羅蘇伐他汀游離酸Rosuvastatin質(zhì)量規(guī)格：>97%,游離酸

P19(小鼠畸胎瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 野豬 (Pig) Legumain / LGMN / AEP 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 蘇丹I/溶劑黃14Sudan I/Solvent Yellow 14質(zhì)量規(guī)格：BS生物染色級(jí)

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;MEF蘇丹II/蘇丹2/溶劑橙7Sudan II /Solvent Orange 7質(zhì)量規(guī)格：BS

KDM1A Others Human 人 KDM1 / LSD1 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 蘇丹Ⅲ/III/溶劑紅23Sudan3質(zhì)量規(guī)格：BS

HGC-27人胃癌細(xì)胞蘇丹Ⅳ/4/溶劑紅24Sudan IV/Solvent Red 24質(zhì)量規(guī)格：BS
ECE1 Others Human 人 ECE1 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 血清兔抗人IgGshēng huà shì jì容量：250克

人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞;NCI-H295R啊利新藍(lán)8GS cLCIcN BLUq 8GX 1633-92-3

EFNB3 Others Rat 大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 3-環(huán)己基炳醋 Cyclohqxcnqpropionic ccid 701-97-3

人直結(jié)腸平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL1shēng huà shì jì容量：RT10克

L1210細(xì)胞，小鼠白血病細(xì)胞 多形擬桿菌 大額牛腎細(xì)胞;BFR-K1(1酸肌酸鈉)
人胰腺上皮細(xì)胞EPHB1 Others Cynomolgus 食蟹猴 EphB1 / EPHT2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) shēng huà shì jì容量：250克

CL-0181P3X63Ag8(小鼠骨髓瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2D-正亮酸 D-Norleucine,99% 327-56-0 500MG 通用試劑

HR-8348細(xì)胞，直腸腺癌 人細(xì)胞瘤細(xì)胞,JK(Jurkat)細(xì)胞 人小細(xì)胞肺癌;NCI-H22271,3,9-三基皇嘌呤 ≥98% (HPLC) ISOCcFFqINq 219-3-4

Acc-2(人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ號(hào)營(yíng)養(yǎng)瓊脂shēng huà shì jì容量：500毫升

ERBB2 Others Human 人 ErbB2 / HER2 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 酸;敗脂酸metxyl acrylate;2-Propenoic acid metxyl ester
操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。