實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性極好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性最好的定量方法，已得到全世界的公認，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：牦牛源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒說明書

英文名稱：

貨號: GOY-M4703

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品運輸：低溫運輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品及特點:

是從土壤農(nóng)桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉基因植物研究中最為常用的一種篩選標記基因，因此本公司根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據(jù) 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 保守區(qū)域設計引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的

鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分，但不能檢測其他非 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個檢測過程（按一個樣品計）所需時間僅為 2.0 小時。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

操作步驟：

下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規(guī)PCR 檢測試劑盒 (一步法)，具體產(chǎn)品操作以說明書為準。

第1步：樣本處理：

第2步：試劑制備：

第3步：PCR體系建立：

第4步：啟動PCR反應

第5步：電泳結果分析

191bp為內控對照條帶，表明PCR反應正常。

當樣本存在支原體污染時，由于內控對照與支原體DNA存在競爭，內控對照條帶變弱（例如支原體DNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內控對照條帶會完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結果。

如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內控對照條帶變弱（和陰性對照相比），此時應先進行DNA抽提（推薦使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）

10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

f大鼠Active Caspase-7   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝     Methyl 3-amino-2-[[(2'-cyanobiphenyl-4-yl)methyl]amino]benzoate  136304-78-4  中文名：  分子式：C22H19N3O2 

大鼠Active Caspase-3   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  Methyl 3-amino-2-[[(2'-cyanobiphenyl-4-yl)methyl]amino]benzoate  136304-78-4  中文名：  分子式：C22H19N3O2  度：98.0%  關鍵詞： 

大鼠Ⅱ型膠原(ColⅡ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tolvaptan  中文名：托伐普坦  分子式：C26H25ClN2O3 

大鼠 C 反應蛋白 (rat CRP)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 ADI     Methyl (9Z,11E)-13-hydroxyoctadeca-9,11-dienoate  109837-85-6  中文名：  分子式：C19H34O3 

大量DNA產(chǎn)物化試劑盒   A lot of DNA product purification kit  Axitinib  中文名：阿西替尼  分子式：C22H18N4OS  度：98.0%

Imatinib  152459-95-5  中文名：伊馬替尼  分子式：C29H31N7O    人內皮細胞生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Mitiglinide calcium  145525-41-3  中文名：米格列奈鈣  分子式：C19H25NO3    豚鼠白介素4(IL-4)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

9-Aminominocycline hydrochloride  149934-21-4  中文名：  分子式：C23H29ClN4O7    Human cytochrome P450c21A/21- hydroxylase (CYP21A) ELISA Kit 人細胞色素P450c21A/21-羥化酶(CYP21A)ELISA試劑盒

Minocycline hydrochloride  13614-98-7  中文名：  分子式：C23H28ClN3O7    HumanMousemyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAkit 人髓過氧化物酶特異性抗中性粒細胞胞質抗體IgG(MPO-ANCAIgG)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Benzyl 2-aminoacetate p-toluenesulfonate  1738-76-7  中文名：  分子式：C16H19NO5S    HumancyclophilinB,CyPBELISA試劑盒人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素B(CyPB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T線粒體復合物V蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25次  2-[(6-Chloro-3,4-dihydro-3-methyl-2,4-dioxo-1(2H)-pyrimidinyl)methyl]benzonitrile  865758-96-9  中文名：  分子式：C13H10ClN3O2  度：98.0%  關鍵詞： 

線粒體復合物I蛋白共沉淀分析試劑盒5次  2-[(Acetylthio)methyl]-phenylpropionic acid  中文名：  分子式：C12H14O3S  度：98.0%

線粒體復合物I蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25次  22-Dehydroclerosteryl acetate  中文名：  分子式：C31H48O2  度：93.0%

線粒體復合物IV蛋白共沉淀分析試劑盒5次  2-Acetonaphthone  中文名：2'-萘乙酮  分子式：C12H10O  度：98.0%

線粒體復合物IV蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25次  2-Allylphenol  中文名：2-烯丙基酚  分子式：C9H10O  度：98.0%

牦牛源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒說明書Bis(4-bromophenyl)acetylene  中文名：二(4-溴苯基)乙炔  分子式：C14H8Br2  度：98.0%  小鼠白介素2可溶性受體β鏈(IL-2sRβ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

1,4-Bis(5-phenyl-2-oxazolyl)benzene  中文名：1,4-雙(5-苯基-2-惡唑基)苯  分子式：C24H16N2O2  度：98.0%  小鼠白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

2,4-Bis(α,α-dimethylbenzyl)phenol  中文名：2,4-雙(α,α-二甲基苯甲基)苯酚  分子式：C24H26O  度：98.0%  小鼠白介素28（IL-28）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Bis(carboxymethyl) trithiocarbonate  中文名：雙(羧甲基)三硫代碳酸鹽  分子式：C5H6O4S3  度：98.0%  小鼠白介素27(IL-27)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Bis(4-hydroxy-3,5-dimethylphenyl) sulfone  中文名：雙(4-羥基-3,5-二甲苯基)砜  分子式：C16H18O4S  度：98.0%  小鼠白介素23(IL-23)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

服務流程：

牦牛源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒說明書1、根據(jù)客戶提供的基因序列設計特異性引物和熒光探針（染料法只需設計引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進行逆轉錄

3、實時熒光定量PCR

4、提供完整的實驗結果報告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）