PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實(shí)現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

s可溶性細(xì)胞表面分化抗原40配體   英文名稱：   Soluble Cluster of differeiation aigen 40 ligand   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   sCD40L  Dihydrosenkyunolide C  195142-72-4  中文名：二氫洋川芎內(nèi)酯C  分子式：C12H14O3 

可溶性髓系細(xì)胞觸發(fā)受體-1   英文名稱：   soluble iggering receptor expressed on myeloid cells-1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   sEM-1  Pazufloxacin mesilate  中文名：甲磺酸帕珠沙星  分子式：C17H19FN2O7S 

可溶性白細(xì)胞抗原G   英文名稱：   soluble leukocyte aigen G   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   sHLA-G  Norethindrone  中文名：炔諾酮  分子式：C20H26O2 

可溶性白細(xì)胞抗原 G5(sHLA-G5)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Norfloxacin  70458-96-7  中文名：諾氟沙星  分子式：C16H18FN3O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

可溶性白細(xì)胞抗原 G(sHLA-G)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Norfloxacin  中文名：諾氟沙星  分子式：C16H18FN3O3

7-Amino-3-methyl-3-cephem-4-carboxylic acid  22252-43-3  中文名：  分子式：C8H10N2O3S    人組胺elisa試劑盒   人組胺試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人組胺試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人組胺試劑盒、人組胺elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Candesartan methyl ester  139481-69-9  中文名：  分子式：C25H22N6O3    人足細(xì)胞標(biāo)記蛋白elisa試劑盒   人足細(xì)胞標(biāo)記蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人足細(xì)胞標(biāo)記蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人足細(xì)胞標(biāo)記蛋白試劑盒、人足細(xì)胞標(biāo)記蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Ethyl 2-ethoxy-1-[(2'-cyanobiphenyl-4-yl)methyl]-1H-benzimidazole-7-carboxylate  139481-41-7  中文名：  分子式：C26H23N3O3    人總前列腺特異抗原elisa試劑盒   人總前列腺特異抗原試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人總前列腺特異抗原試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人總前列腺特異抗原試劑盒、人總前列腺特異抗原elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Ethyl 2-(((2'-cyano-[1,1'-biphenyl]-4-yl)methyl)amino)-3-nitrobenzoate  136285-67-1  中文名：  分子式：C23H19N3O4    人總膽汁酸elisa試劑盒   人總膽汁酸試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人總膽汁酸試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人總膽汁酸試劑盒、人總膽汁酸elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  

Methyl 2-(((2'-cyano-[1,1'-biphenyl]-4-yl)methyl)amino)-3-nitrobenzoate  139481-28-0  中文名：  分子式：C22H17N3O4    人組胺(HIS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T小鼠TH糖蛋白   英文名稱：   Mouse Tamm Horsfall Protein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   THP  Folic acid  59-30-3  中文名：葉酸  分子式：C19H19N7O6  度：98.0%   

小鼠TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Betaxolol hydrochloride  63659-19-8  中文名：鹽酸倍他洛爾  分子式：C18H30ClNO3 

小鼠Slit2elisa試劑盒   小鼠Slit2試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠Slit2試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠Slit2試劑盒、小鼠Slit2eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     Benzoyl-DL-valine  中文名：苯甲酰-DL-纈氨酸  分子式：C12H15NO3 

小鼠Slit2ELISAKit   ELISA.   96T/48T  CTU Guanamine  22535-90-6  中文名：  分子式：C17H26N10O4 

小鼠S100鈣結(jié)合蛋白A7   英文名稱：   Mouse S100 Calcium Binding Protein A7   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   S100A7  Benzyl cinnamate  中文名：肉桂酸苯甲酯  分子式：C16H14O2

耶爾森菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒圖片Chloramphenicol  中文名：氯霉素  分子式：C11H12Cl2N2O5  度：98.0%  豚鼠降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Ganciclovir  中文名：更昔洛韋  分子式：C9H13N5O4  度：98.0%  豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Oxiracetam  中文名：奧拉西坦  分子式：C6H10N2O3  度：98.0%  豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Piracetam  中文名：吡拉西坦  分子式：C6H10N2O2  度：98.0%  豚鼠鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Fudosteine  中文名：福多斯坦  分子式：C6H13NO3S  度：98.0%  豚鼠肝細(xì)胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

耶爾森菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒圖片1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。