PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

s綠膿桿菌(PA)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  3-Quinuclidinone  3731-38-2  中文名：3-奎寧環(huán)酮  分子式：C7H11NO 

綠膿桿菌(PA)核酸檢測試劑盒   48T  3-Oxo-4-aza-5-alpha-androstane-17β-carboxylic acid  中文名：  分子式：C19H29NO3  度：98.0%

鹿胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  3-Benzalphthalide  575-61-1  中文名：3-亞芐基苯酞  分子式：C15H10O2 

鹿血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              3-Aminopiperidine dihydrochloride  中文名：  分子式：C5H14Cl2N2 

鹿內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  3-Aminopiperidine dihydrochloride  中文名：  分子式：C5H14Cl2N2  度：98.0%

Androstenediol-3-acetate  1639-43-6  中文名：雄甾烯二醇-3-乙酸酯  分子式：C21H32O3    人鐵蛋白(FE)酶聯(lián)吸附測定試劑盒   Human FE (Ferritin) ELISA Kit               

Methenolone enanthate  303-42-4  中文名：美替諾龍庚酸酯  分子式：C27H42O3    人組織因子(TF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Methenolone acetate  434-05-9  中文名：美替諾龍醋酸酯  分子式：C22H32O3    人組織型纖維溶酶激活物（t-PA）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Androst-2-en-17-one  963-75-7  中文名：5α-雄甾-2-烯-17-酮  分子式：C19H28O    人組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Epiandrosterone  481-29-8  中文名：表雄酮  分子式：C19H30O2    人組織相容性復(fù)合體Ⅰ類相關(guān)基因D（MICD）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝小鼠α半乳糖基抗原(α-Gal)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Fumaric acid  中文名：  分子式：C4H4O4 

小鼠α半乳糖基抗體(Gal)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Bis(4-bromophenyl)acetylene  2789-89-1  中文名：二(4-溴苯基)乙炔  分子式：C14H8Br2  度：98.0%   

小鼠αN已?；咸擒彰?/span>elisa試劑盒   小鼠αN已?；咸擒彰冈噭┖?/span>   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠αN已?；咸擒彰冈噭┖?，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠αN已?；咸擒彰冈噭┖?、小鼠αN已?；咸擒彰?/span>eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Bis(4-bromophenyl)amine  16292-17-4  中文名：雙(4-溴苯基)胺  分子式：C12H9Br2N 

小鼠αN已酰基葡糖苷酶(αNAG)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Bis(4-bromophenyl)acetylene  2789-89-1  中文名：二(4-溴苯基)乙炔  分子式：C14H8Br2 

小鼠αN已?；咸擒彰?/span>(αNAG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Bindone  中文名：雙茚二酮  分子式：C18H10O3

酵母菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明書Cialis  171596-29-5  中文名：西力士  分子式：C22H19N3O4    組織HPV6(HUMANPAPILLOMAVIRUS-6)病毒定性檢測試劑盒20次

Varenicline tartrate  375815-87-5  中文名：酒石酸伐侖克林  分子式：C17H19N3O6    Humanplatelet-associatedimmunoglobulins,PAIgELISAKit人血小板相關(guān)球蛋白(PAIg)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Phenformin  114-86-3  中文名：苯乙雙胍  分子式：C10H15N5    兔子中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

2,4-Dihydroxypyridine  626-03-9  中文名：  分子式：C5H5NO2    Human cyclin D2 (Cyclin-D2) ELISA Kit 人細胞周期素D2(Cyclin-D2)ELISA試劑盒

2,4-Dihydroxy-3-nitropyridine  89282-12-2  中文名：  分子式：C5H4N2O4    HumahyroidAibody,TAbELISAKit 人甲狀腺抗體(TAb)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

注意事項：

酵母菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明書1．基礎(chǔ)程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。