PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

s腦膜炎奈瑟菌通用型(NM-U)核酸檢測試劑盒   48T                 3β-Acetoxy-5α-androstan-17β-ol  中文名：3-乙酰基-5α-雄烷二醇  分子式：C21H34O3 

納米二氧化鈦                    Ribavirin  36791-04-5  中文名：利巴韋林  分子式：C8H12N4O5 

莫氏立克次體(RM)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T                 3-Amino-3-phenylpropionic acid  中文名：C9H11NO2  分子式：C9H11NO2 

膜聯(lián)蛋白5   英文名稱：   Annexin 5   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ANXA-5  3β-Hydroxyporiferast-5-en-7-one  中文名：  分子式：C29H48O2 

膜聯(lián)蛋白2   英文名稱：   Annexin 2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ANXA-2  Otophylloside B  中文名：青陽參苷B  分子式：C49H78O16

4-Amino-2,5-dimethoxy-N-phenylbenzenesulphonamide  52298-44-9  中文名：4-氨基-2,5-二甲氧基-N-苯基苯磺酰胺  分子式：C14H16N2O4S    人組織因子elisa試劑盒   人組織因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人組織因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人組織因子試劑盒、人組織因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

N-Acetyl-L-tyrosine  537-55-3  中文名：乙酰酪氨酸  分子式：C11H13NO4    人組織型纖溶酶原激活劑elisa試劑盒   人組織型纖溶酶原激活劑試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人組織型纖溶酶原激活劑試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人組織型纖溶酶原激活劑試劑盒、人組織型纖溶酶原激活劑elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

Allopurinol  315-30-0  中文名：別嘌醇  分子式：C5H4N4O    乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒（微板法）

Adipic dihydrazide  1071-93-8  中文名：己二酸二  分子式：C6H14N4O2    β-N-乙?；咸烟擒彰福?/span>NAG）試劑盒（比色法）

2-Acetamido-2-deoxy-D-glucose  7512-17-6  中文名：N-乙酰氨基葡萄糖  分子式：C8H15NO6    組織鐵測定試劑盒（比色法）小鼠β甘露糖苷酶elisa試劑盒   小鼠β甘露糖苷酶試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠β甘露糖苷酶試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠β甘露糖苷酶試劑盒、小鼠β甘露糖苷酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     Ketoprofen  22071-15-4  中文名：酮基布洛芬  分子式：C16H14O3 

小鼠β甘露糖苷酶(βManase)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Bisoprolol fumarate  中文名：富馬酸比索洛爾  分子式：C22H35NO8  度：98.0%

小鼠β甘露糖苷酶(βManase)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Bis(4-hydroxy-3,5-dimethylphenyl) sulfone  中文名：雙(4-羥基-3,5-二甲苯基)砜  分子式：C16H18O4S  度：98.0%

小鼠β酚(β-Nph)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  N-(2-methyl-4-oxopentan-2-yl)-sulfamethoxazole  中文名：  分子式：C16H21N3O4S 

小鼠β酚(β-naphthol)LISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Bisphenol P  中文名：雙酚P  分子式：C24H26O2

班氏絲蟲探針法熒光定量PCR試劑盒廠家cis-Octahydro-isoindole  中文名：  分子式：C8H15N  度：98.0%  小鼠16α羥基雌1(16-αOHE-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

2-Benzylsuccinic acid  中文名：  分子式：C11H12O4  度：98.0%  小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

3-(tert-Butoxycarbonyl)-2,2-dimethyl-4-phenyloxazolidine-5-carboxylic acid  中文名：  分子式：C17H23NO5  度：98.0%  小鼠11β羥基類固醇脫氫酶(11β-HSD)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Atorvastatin calcium  中文名：阿托伐他汀鈣  分子式：C33H35FN2O5  度：98.0%  小鼠1,4,5-三0酸肌醇（IP3）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

(2R,3S)-3-Phenylisoserine ethyl ester  中文名：  分子式：C11H15NO3  度：98.0%  小鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βDglucosidase)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

班氏絲蟲探針法熒光定量PCR試劑盒廠家1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。