PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產物不斷積累，熒光信號也會相應的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務：

韋塞爾斯布朗病毒探針法熒光定量PCR試劑盒運輸簡介：實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產品產品：

葡萄糖（Glu）測試盒   Surface aigen (enzymatic method) test case  p-Anisoin  119-52-8  中文名：對茴香偶姻  分子式：C16H16O4  度：98.0%  關鍵詞： 

蘋果酸脫氫酶測試盒（測血清）   Apple acid dehydrogenase test case (Ce Xueqing)                 3-Acetylcoumarin  中文名：3-乙?；愣顾?/span>  分子式：C11H8O3 

旁分泌的方式分泌血小板源性生長因子受體β   英文名稱：   Platelet-derived growth factor receptor beta   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   PDGF Rβ  Periplocin  13137-64-9  中文名：杠柳毒苷  分子式：C36H56O13 

瘧原蟲(Pm)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T  Norfloxacin lactate  97867-34-0  中文名：乳酸諾氟沙星  分子式：C19H24FN3O6  度：98.0%  關鍵詞： 

凝血酶敏感蛋白-1   英文名稱：   thrombospondin 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TSP-1  Pazufloxacin mesilate  163680-77-1  中文名：甲磺酸帕珠沙星  分子式：C17H19FN2O7S

Amisulpride  71675-85-9  中文名：阿米舒必利  分子式：C17H27N3O4S    is,Hydrochloride   500g

5-Amino-2-methylindole  7570-49-2  中文名：5-氨基-2-甲基吲哚  分子式：C9H10N2    曲拉通X-100   100ml

9-Anthracenylmethyl acrylate  31645-34-8  中文名：丙烯酸-9-蒽甲酯  分子式：C18H14O2    itonX-100   250ml              

Spongouridine  3083-77-0  中文名：阿糖尿苷  分子式：C9H12N2O6    腮腺炎病毒(MuV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

2-Aminothiazol-4-acetic acid  29676-71-9  中文名：2-氨基噻唑-4-乙酸  分子式：C5H6N2O2S    麻風桿菌(ML)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T小鼠γ干擾素誘導蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Bortezomib  179324-69-7  中文名：硼替佐米  分子式：C19H25BN4O4 

小鼠γ干擾素誘導蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Boldenone  846-48-0  中文名：寶丹酮  分子式：C19H26O2  度：98.0%  關鍵詞： 

小鼠γ干擾素elisa試劑盒   小鼠γ干擾素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠γ干擾素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠γ干擾素試劑盒、小鼠γ干擾素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  Boldenone acetate  2363-59-9  中文名：寶丹酮醋酸酯  分子式：C21H28O3 

小鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Boldenone undecylenate  中文名：寶丹酮十一烯酸酯  分子式：C30H44O3  度：98.0%

小鼠γ干擾素(IFN-γ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Manidipine dihydrochloride  89226-75-5  中文名：鹽酸馬尼地平  分子式：C35H40Cl2N4O6  度：98.0%  關鍵詞：

韋塞爾斯布朗病毒探針法熒光定量PCR試劑盒運輸Cleroindicin F  189264-47-9  中文名：  分子式：C8H10O3  度：97.0%  關鍵詞：  臭牡丹; 長管大青; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠鉤端螺旋體IgG(LepIgG)ELISAKit   ELISA.   96T

Cleroindicin E  165197-71-7  中文名：  分子式：C8H14O3  度：98.0%  關鍵詞：  長管大青; 老鴉煙筒花; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Cleroindicin D  189264-45-7  中文名：  分子式：C8H12O4  度：97.0%  關鍵詞：  長管大青; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠皮質醇elisa試劑盒   小鼠皮質醇試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠皮質醇試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠皮質醇試劑盒、小鼠皮質醇elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Cleroindicin C  183626-28-0  中文名：  分子式：C8H12O3  度：%  關鍵詞：  長管大青; 老鴉煙筒花; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠牛血清白蛋白elisa試劑盒   小鼠牛血清白蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠牛血清白蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠牛血清白蛋白試劑盒、小鼠牛血清白蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Cleroindicin B  107389-91-3  中文名：  分子式：C8H14O3  度：96.0%  關鍵詞：  紅波羅花; 長管大青; 中藥對照品; 中藥標準品; 植物提取物; 天然產物; 天然產物庫  小鼠牛小腸堿性0酸酶elisa試劑盒   小鼠牛小腸堿性0酸酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠牛小腸堿性0酸酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠牛小腸堿性0酸酶試劑盒、小鼠牛小腸堿性0酸酶elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

注意事項：

1．基礎程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應液的配制；

6．PCR技術的基本原理；

7．PCR的反應動力學；

8．PCR擴增產物；

9．PCR反應體系與反應條件。點擊了解更公司產品。