PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數的遞增，PCR產物不斷積累，熒光信號也會相應的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監(jiān)測。本公司根據您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務：

簡介：實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術不僅實現了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據客戶的樣品數量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產品產品：

f山羊腦啡肽（ENK）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  3H-1,2-Benzodithiol-3-one-1,1-dioxide  66304-01-6  中文名：3H-1,2-苯并二硫醇-3-酮-1,1-二氧化物  分子式：C7H4O3S2  度：90.0%  關鍵詞： 

山羊球蛋白G   英文名稱：   Immunoglobulin G   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   IgG  3-Ethyl-4-methyl-3-pyrrolin-2-one  766-36-9  中文名：  分子式：C7H11NO  度：98.0%  關鍵詞： 

山羊球蛋白A   英文名稱：   Immunoglobulin A   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   IgA  3-Ethoxyandrosta-3,5-dien-17β-ol  26614-48-2  中文名：3-乙氧基雄-3,5-二烯-17β醇  分子式：C21H32O2  度：93.0%   

山羊檢測(e)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           3-Benzyl-5-(2-hydroxyethyl)-4-methylthiazolium chloride  中文名：3-芐基-5-(2-羥乙基)-4-甲基氯化噻唑鎓  分子式：C13H16ClNOS 

山羊壞死因子αelisa試劑盒   山羊壞死因子α試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   山羊壞死因子α試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：山羊壞死因子α試劑盒、山羊壞死因子α elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  3-Ethoxy-4-ethoxycarbonyl phenylacetic acid  99469-99-5  中文名：  分子式：C13H16O5  度：98.0%  關鍵詞：

Mannioside A  中文名：  分子式：C39H62O13  度：%  兔抗腦組織抗體(ABAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

3,5-Cycloergosta-6,8(14),22-triene  中文名：  分子式：C28H42  度：%  兔p53(p53)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Ergosterol  中文名：麥角甾醇  分子式：C28H44O  度：96.0%  兔Bcl-2相關X蛋白(BAX)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

α-Spinasterol  中文名：α-菠甾醇  分子式：C29H48O  度：97.0%  兔阿霉素(ADR)ELISAKit   ELISA.   96T/48T            

α-Spinasterone  中文名：  分子式：C29H46O  度：%  兔結締組織生長因子(rabbit CTGF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝小鼠骨保護素配體elisa試劑盒   小鼠骨保護素配體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠骨保護素配體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠骨保護素配體試劑盒、小鼠骨保護素配體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  Dehydroepiandrosterone enanthate  23983-43-9  中文名：普拉雄酮庚酸酯  分子式：C26H40O3  度：98.0%  關鍵詞： 

小鼠骨保護素配體(OPGL)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Dehydroepiandrosterone acetate  853-23-6  中文名：醋酸去氫表雄酮  分子式：C21H30O3 

小鼠骨保護素配體(OPGL)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Benzoin oxime  中文名：安息香肟  分子式：C14H13NO2 

小鼠骨保護素配體(mouse OPGL)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  Dehydroadynerigenin digitaloside  中文名：  分子式：C30H42O8  度：97.0%

小鼠骨保護素配體   英文名稱：   Osteoprotegerin ligand   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   OPGL  Dehydro-α-lapachone  15297-92-4  中文名：  分子式：C15H12O3

斑點病密螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒圖片Dioxopromethazine hydrochloride  中文名：鹽酸二氧丙嗪  分子式：C17H21ClN2O2S    豬生長抑素elisa試劑盒   豬生長抑素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬生長抑素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：豬生長抑素試劑盒、豬生長抑素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  

Diosgenin  中文名：薯蕷皂苷元  分子式：C27H42O3    豬水泡性口炎病毒(VSV)核酸檢測試劑盒(-PCR法)   48T

Dioscin  中文名：薯蕷皂苷  分子式：C45H72O16    傳染性胃腸炎病毒(PTGV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

Dinitolmide  中文名：二硝托胺  分子式：C8H7N3O5    傳染性胃腸炎病毒(PTGV)核酸檢測試劑盒(-PCR法)   48T

Dimetridazole  中文名：二甲硝咪唑  分子式：C4H5N3O2    水泡病毒(SVDV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

注意事項：

斑點病密螺旋體探針法熒光定量PCR試劑盒圖片1．基礎程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應時間；

4．循環(huán)次數；

5．PCR 反應液的配制；

6．PCR技術的基本原理；

7．PCR的反應動力學；

8．PCR擴增產物；

9．PCR反應體系與反應條件。點擊了解更公司產品。