PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f蘇云金芽孢桿菌蛋白(BT)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  4-Amino-N-methylbenzamide  6274-22-2  中文名：4-氨基-N-甲基苯甲酰胺  分子式：C8H10N2O 

蘇木素染液   Fast HE tissues and exfoliated cells of dye  4,6-Dichloro-5-nitro-2-propylthiopyrimidine  145783-14-8  中文名：  分子式：C7H7Cl2N3O2S 

松弛素-2   英文名稱：   Human Relaxin-2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   RLN-2  4,4'-Bis(2-benzoxazolyl)stilbene  中文名：4,4'-雙(2-苯并惡唑基)芪  分子式：C28H18N2O2  度：98.0%

四硼酸   5kg  4,5-Dimethoxy-1-cyanobenzocyclobutane  中文名：  分子式：C11H11NO2  度：98.0%

四甲基聯(lián)   5g  4-(Phenylthio)benzyl alcohol  中文名：  分子式：C13H12OS  度：98.0%

Estradiol  中文名：雌二醇  分子式：C18H24O2  度：99.0%  兔子胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Estrone  中文名：雌酮  分子式：C18H22O2  度：99.0%  兔子胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Cynatratoside A  中文名：白薇苷A  分子式：C28H40O8  度：98.5%  兔子胰島素(INS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Sprengerinin A  中文名：  分子式：C38H60O12  度：%  兔色素上皮衍生因子elisa試劑盒   兔色素上皮衍生因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔色素上皮衍生因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔色素上皮衍生因子試劑盒、兔色素上皮衍生因子 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Sprengerinin C  中文名：  分子式：C44H70O16  度：98.0%  兔熱休克蛋白90elisa試劑盒   兔熱休克蛋白90試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔熱休克蛋白90試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔熱休克蛋白90試劑盒、兔熱休克蛋白90 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。小鼠核轉(zhuǎn)錄因子p65(mouse NF-kBp65)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  Diclazuril  中文名：地克珠利  分子式：C17H9Cl3N4O2  度：99.0%

小鼠核轉(zhuǎn)錄因子   英文名稱：   Nuclear anscription Factor NF-KB   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   NF-κB  Pitavastatin ethyl ester  中文名：  分子式：C27H28FNO4 

小鼠核因子κB抑制蛋白α（IKB-α）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Dibucaine hydrochloride  中文名：鹽酸地布卡因  分子式：C20H30ClN3O2  度：98.0%

小鼠核因子-κB亞基ρ65親和肽   英文名稱：   Nuclear anscription Factor NF-Κb ρ65   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   NF-Κb ρ65  Pitavastatin ethyl ester  167073-19-0  中文名：  分子式：C27H28FNO4  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠核因子-κB亞基p65親和肽(NF-κBp65)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Dibucaine hydrochloride  1961/12/1  中文名：鹽酸地布卡因  分子式：C20H30ClN3O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：

黃桿菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒運輸Drospirenone  中文名：屈螺酮  分子式：C24H30O3    豬腦素elisa試劑盒   豬腦素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬腦素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：豬腦素試劑盒、豬腦素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  

Dronedarone hydrochloride  中文名：鹽酸決奈達隆  分子式：C31H45ClN2O5S    豬肉毒堿脂酰轉(zhuǎn)移酶（CACT）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Drevogenin A  中文名：  分子式：C28H42O7    豬熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Dregeoside Ga1  中文名：  分子式：C49H80O17    豬熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Dregeoside Da1  中文名：  分子式：C42H70O15    豬熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項：

黃桿菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒運輸1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。