PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在產(chǎn)品產(chǎn)品：

f土壤纖維素酶（S-CL）測試盒   可見分光光度法   50管/24樣  4-Amino-3-hydroxybenzoic acid  2374-03-0  中文名：4-氨基-3-羥基苯甲酸  分子式：C7H7NO3  度：98.0%   

土壤無機0（S-PHOS）含量測試盒   可見分光光度法   50管/48樣  4-Amino-3-hydroxy-1-naphthalenesulfonic acid  116-63-2  中文名：4-氨基-3-羥基-1-萘磺酸  分子式：C10H9NO4S  度：98.0%   

土壤無機0（S-PHOS）含量測試盒   可見分光光度法   50管/24樣  4-Aminoantipyrine  中文名：4-氨基安替比林  分子式：C11H13N3O  度：99.0%

土壤脫氫酶(SDHA)測試盒   可見分光光度法   50管/24樣              4-Aminoantipyrine  中文名：4-氨基安替比林  分子式：C11H13N3O 

土壤酸性蛋白酶試劑盒   可見分光光度法   50管/24樣  4-Amino-2,5-dimethoxy-N-phenylbenzenesulphonamide  中文名：4-氨基-2,5-二甲氧基-N-苯基苯磺酰胺  分子式：C14H16N2O4S  度：99.0%

Pregn-5-ene-3β,17α,20S-triol  中文名：  分子式：C21H34O3  度：98.0% 

Qingyangshengenin 3-O-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-digitoxopyranoside  中文名：  分子式：C41H58O14  度：97.5%  兔血小板活化因子(rabbit PAF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

Periplocoside O  中文名：北五加皮苷O  分子式：C36H56O10  度：98.0%  兔前列腺素E2(rabbit PGE2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

Otophylloside T  中文名：  分子式：C48H70O18  度：98.0%  兔纖溶酶原激活劑物-1 (rabbit PAI-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝

Periplocoside M  中文名：北五加皮苷M  分子式：C34H52O9  度：98.0%  兔相關(guān)蛋白A(rabbit PAPP-A)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝小鼠活化素A(Activin-A)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Dimetridazole  551-92-8  中文名：二甲硝咪唑  分子式：C4H5N3O2  度：99.0%   

小鼠活化蛋白elisa試劑盒   小鼠活化蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠活化蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠活化蛋白試劑盒、小鼠活化蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     Dinitolmide  148-01-6  中文名：二硝托胺  分子式：C8H7N3O5 

小鼠活化蛋白C(APC)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Dimetridazole  551-92-8  中文名：二甲硝咪唑  分子式：C4H5N3O2 

小鼠活化蛋白C(APC)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Ethyl (1-hydroxy-4-oxocyclohexa-2,5-dien-1-yl)acetate  中文名：  分子式：C10H12O4 

小鼠黃體生成素釋放(LHRH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tetraethyl ranelate  58194-26-6  中文名：  分子式：C20H26N2O8S  度：98.0%  關(guān)鍵詞：

鏈狀帶絳蟲探針法熒光定量PCR試劑盒說明書Emtricitabine  中文名：恩曲他濱  分子式：C8H10FN3O3S    豬(HYD)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Empagliflozin  中文名：依帕列凈  分子式：C23H27ClO7    豬前列環(huán)素（PGI2）Elisa試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Emodin  中文名：大黃素  分子式：C15H10O5    豬葡萄糖蛋白2(GL2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Eleutheroside C  中文名：  分子式：C8H16O6    豬熱休克蛋白40(HSP-40)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Edaravone  中文名：依達拉奉  分子式：C10H10N2O    豬熱休克蛋白20(HSP-20)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項：

鏈狀帶絳蟲探針法熒光定量PCR試劑盒說明書1．基礎(chǔ)程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。