服務(wù)流程：

1、根據(jù)客戶提供的基因序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針（染料法只需設(shè)計(jì)引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄

3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR

4、提供完整的實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴(kuò)增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：類圓線蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明書

英文名稱：Strongyloides spp.

貨號: GOY-M4535

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品及特點(diǎn):

是從土壤農(nóng)桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉(zhuǎn)基因植物研究中最為常用的一種篩選標(biāo)記基因，因此本公司根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據(jù) 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的

鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分，但不能檢測其他非 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個(gè)檢測過程（按一個(gè)樣品計(jì)）所需時(shí)間僅為 2.0 小時(shí)。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

操作步驟：

下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規(guī)PCR 檢測試劑盒 (一步法)，具體產(chǎn)品操作以說明書為準(zhǔn)。

第1步：樣本處理：

第2步：試劑制備：

第3步：PCR體系建立：

第4步：啟動(dòng)PCR反應(yīng)

第5步：電泳結(jié)果分析

191bp為內(nèi)控對照條帶，表明PCR反應(yīng)正常。

當(dāng)樣本存在支原體污染時(shí)，由于內(nèi)控對照與支原體DNA存在競爭，內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內(nèi)控對照條帶會(huì)完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結(jié)果。

如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ê完幮詫φ障啾龋藭r(shí)應(yīng)先進(jìn)行DNA抽提（推薦使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR：

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性極好，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。

外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性最好的定量方法，已得到全世界的公認(rèn)，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

β兔白介素17(IL-17)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  4-Benzoyloxy-2-azetidinone  28562-58-5  中文名：4-苯甲酰氧基-2-氮雜環(huán)丁酮  分子式：C10H9NO3  度：98.0%   

兔白介素-12(rabbit IL-12)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     4-Benzyl N-carbobenzoxy-L-aspartate  中文名：N-芐氧羰基-L-天冬氨酸-4-芐脂  分子式：C19H19NO6 

兔白介素-10(rabbit IL-10)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  4-Benzyl N-carbobenzoxy-L-aspartate  中文名：N-芐氧羰基-L-天冬氨酸-4-芐脂  分子式：C19H19NO6  度：98.0%

兔白介素1（IL-1）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  4-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-aspartate  中文名：N-(叔丁氧羰基)-L-天冬氨酸-4-芐酯  分子式：C16H21NO6  度：98.0%

兔阿霉素(ADR)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           4-Benzyl N-(tert-butoxycarbonyl)-L-aspartate  中文名：N-(叔丁氧羰基)-L-天冬氨酸-4-芐酯  分子式：C16H21NO6

Deoxylapachol  中文名：  分子式：C15H14O2  度：97.0%  兔子Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

9-Hydroxy-α-lapachone  中文名：  分子式：C15H14O4  度：96.0%  兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ/RLAⅡ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Dehydro-α-lapachone  中文名：  分子式：C15H12O3  度：97.5%  兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/RLAⅠ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

α-Lapachone  中文名：  分子式：C15H14O3  度：98.0%  兔壞死因子α（TNF-α）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

9-Methoxy-α-lapachone  中文名：  分子式：C16H16O4  度：%  兔脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1(mouse TIMP-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  DL-Alanyl-DL-Methionine  中文名：DL-丙氨酰-DL-蛋氨酸  分子式：C8H16N2O3S  度：99.0%

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1   英文名稱：   Tissue inhibitors of metalloproteinases 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TIMP-1  n-Butyl β-D-fructofuranoside  80971-60-4  中文名：正丁基-β-D-呋喃果糖苷  分子式：C10H20O6  度：97.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶elisa試劑盒   小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶試劑盒、小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Ethyl β-D-xylopyranoside  6743-62-0  中文名：  分子式：C7H14O5  度：97.5%  關(guān)鍵詞： 

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9/明膠酶B(MMP-9/GelatinaseB)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  D-Mannitol diacetonide  中文名：  分子式：C12H22O6 

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-9(mouse MMP-9)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     Dioxopromethazine hydrochloride  15374-15-9  中文名：鹽酸二氧丙嗪  分子式：C17H21ClN2O2S

類圓線蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明書Ergosta-4,6,8(14),22-tetraen-3-one  中文名：麥角甾-4,6,8(14),22-四烯-3-酮  分子式：C28H40O  度：96.5%  兔核因子κB受體活化因子配基elisa試劑盒   兔核因子κB受體活化因子配基試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔核因子κB受體活化因子配基試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔核因子κB受體活化因子配基試劑盒、兔核因子κB受體活化因子配基elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Paris Saponin VII  中文名：重樓皂苷VII  分子式：C51H82O21  度：98.0%  兔過氧化物酶體增殖因子活化受體γelisa試劑盒   兔過氧化物酶體增殖因子活化受體γ試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔過氧化物酶體增殖因子活化受體γ試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔過氧化物酶體增殖因子活化受體γ試劑盒、兔過氧化物酶體增殖因子活化受體γ elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

Polyphyllin D  中文名：重樓皂苷D  分子式：C44H70O16  度：98.0%  兔環(huán)0酸鳥苷(rabbit cGMP)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Sitostenone  中文名：豆甾-4-烯-3-酮  分子式：C29H48O  度：96.0%  兔C反應(yīng)蛋白(rabbit CRP)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

6β-Hydroxystigmast-4-en-3-one  中文名：6β-羥基豆甾-4-烯-3-酮  分子式：C29H48O2  度：95.0%  兔軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(rabbit COMP)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

使用方法：

類圓線蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明書一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）

10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對照，6個(gè)用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）