PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f兔凝血酶原片段F1+2(F1+2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  6-Aminouracil  中文名：6-氨基尿嘧啶  分子式：C4H5N3O2  度：98.0%

兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體elisa試劑盒   兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體試劑盒、兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  5-Aminofluorescein  3326-34-9  中文名：5-氨基熒光素  分子式：C20H13NO5  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  5-Amino-2-naphthalenesulfonic acid  119-79-9  中文名：5-氨基-2-萘磺酸  分子式：C10H9NO3S  度：98.0%   

兔尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  5-Amino-1-(2-hydroxyethyl)pyrazole  73616-27-0  中文名：  分子式：C5H9N3O 

兔尿激酶型纖溶酶原激活物elisa試劑盒   兔尿激酶型纖溶酶原激活物試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔尿激酶型纖溶酶原激活物試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔尿激酶型纖溶酶原激活物試劑盒、兔尿激酶型纖溶酶原激活物elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  5-Aminofluorescein  3326-34-9  中文名：5-氨基熒光素  分子式：C20H13NO5

Polyhydroxybutyrate  中文名：聚羥基丁酸酯  分子式：C12H20O7  度：%  兔子抗中性粒細胞顆?？贵welisa試劑盒   兔子抗中性粒細胞顆粒抗體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子抗中性粒細胞顆?？贵w試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子抗中性粒細胞顆?？贵w試劑盒、兔子抗中性粒細胞顆粒抗體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

n-Tritriacontan-16,18-dione  中文名：  分子式：C33H64O2  度：%  兔子可溶性細胞間粘附分子1elisa試劑盒   兔子可溶性細胞間粘附分子1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子可溶性細胞間粘附分子1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子可溶性細胞間粘附分子1試劑盒、兔子可溶性細胞間粘附分子1 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Bi-linderone  中文名：  分子式：C34H32O10  度：96.5%  兔子可溶性細胞粘附分子1elisa試劑盒   兔子可溶性細胞粘附分子1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子可溶性細胞粘附分子1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子可溶性細胞粘附分子1試劑盒、兔子可溶性細胞粘附分子1 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  

vibo-Quercitol  中文名：  分子式：C6H12O5  度：%  兔子巨噬細胞炎性蛋白1αelisa試劑盒   兔子巨噬細胞炎性蛋白1α試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子巨噬細胞炎性蛋白1α試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子巨噬細胞炎性蛋白1α試劑盒、兔子巨噬細胞炎性蛋白1α elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Succinic acid  中文名：  分子式：C4H6O4  度：%  兔子抗中性粒細胞顆粒抗體elisa試劑盒   兔子抗中性粒細胞顆?？贵w試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子抗中性粒細胞顆?？贵w試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子抗中性粒細胞顆粒抗體試劑盒、兔子抗中性粒細胞顆粒抗體elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。小鼠抗α-胞襯蛋白抗體elisa試劑盒   小鼠抗α-胞襯蛋白抗體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠抗α-胞襯蛋白抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠抗α-胞襯蛋白抗體試劑盒、小鼠抗α-胞襯蛋白抗體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     D-Tryptophan methyl ester hydrochloride  14907-27-8  中文名：  分子式：C12H15ClN2O2 

小鼠抗IVIgG抗體ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Epiandrosterone  481-29-8  中文名：表雄酮  分子式：C19H30O2 

小鼠抗IVIgG抗體ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Enalapril maleate  中文名：馬來酸依那普利  分子式：C24H32N2O9  度：98.0%

小鼠巨噬細胞游走抑制因子   英文名稱：   macrophage migration inhibitory factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   MIF  Emtricitabine  中文名：恩曲他濱  分子式：C8H10FN3O3S  度：98.0%

小鼠巨噬細胞移動抑制因子(MIF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Empagliflozin  中文名：依帕列凈  分子式：C23H27ClO7  度：95.0%

念珠狀鏈桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒運輸Ethyl 3-cyclopropyl-3-oxopropanoate  中文名：  分子式：C8H12O3    豬球蛋白A(IgA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Ethyl 3,5-di-O-caffeoylquinate  中文名：3,5-二咖啡酰奎寧酸乙酯  分子式：C27H28O12    豬流行性腹瀉病毒抗體（PEDV）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Ethyl 3-(4-(methylamino)-3-nitro-N-(pyridin-2-yl)benzamido)propanoate  中文名：  分子式：C18H20N4O5    豬0酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Ethyl 3-(3-amino-4-(methylamino)-N-(pyridin-2-yl)benzamido)propanoate  中文名：  分子式：C18H22N4O3    豬球蛋白G(IgG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Ethyl 2-ethoxy-1-[(2'-cyanobiphenyl-4-yl)methyl]-1H-benzimidazole-7-carboxylate  中文名：  分子式：C26H23N3O3    豬球蛋白E(IgE)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項：

念珠狀鏈桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒運輸1．基礎(chǔ)程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。