概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

注意事項(xiàng)：

小蛇菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒圖片1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f兔子白介素9(IL-9)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  6-Chloroguanine riboside  2004/7/1  中文名：6-氯鳥嘌呤核苷  分子式：C10H12ClN5O4  度：95.0%  關(guān)鍵詞： 

兔子白介素8(IL-8/CXCL8)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  6-Fluoro-3-(4-piperidinyl)-1,2-benzisoxazole hydrochloride  84163-13-3  中文名：  分子式：C12H14ClFN2O 

兔子白介素6(IL-6)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  6-Deoxy-3-O-methyl-β-allopyranosyl(1→4)-β-cymaronic acid δ-lactone  中文名：  分子式：C14H24O8  度：98.0%

兔子白介素4(IL-4)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  6-Deoxy-3-O-methyl-β-allopyranosyl(1→4)-β-cymaronic acid δ-lactone  19131-13-6  中文名：  分子式：C14H24O8 

兔子白介素4(IL-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              6-Deoxy-3-O-methyl-β-allopyranosyl(1→4)-β-cymaronic acid δ-lactone  中文名：  分子式：C14H24O8

Sulfamethoxazole  中文名：磺胺甲噁唑  分子式：C10H11N3O3S  度：98.0%  兔組織因子elisa試劑盒   兔組織因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔組織因子試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔組織因子試劑盒、兔組織因子eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Glimepiride  中文名：格列美脲  分子式：C24H34N4O5S  度：98.0%  兔組織因子途徑抑制物elisa試劑盒   兔組織因子途徑抑制物試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔組織因子途徑抑制物試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔組織因子途徑抑制物試劑盒、兔組織因子途徑抑制物eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

N-Demethylricinine  中文名：  分子式：C7H6N2O2  度：98.0%  豚鼠γ干擾素elisa試劑盒   豚鼠γ干擾素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豚鼠γ干擾素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豚鼠γ干擾素試劑盒、豚鼠γ干擾素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

m-Nitrohydrocinnamic acid  中文名：  分子式：C9H9NO4  度：98.0%  豚鼠白介素12elisa試劑盒   豚鼠白介素12試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豚鼠白介素12試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豚鼠白介素12試劑盒、豚鼠白介素12eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

N-(2-Hydroxyethyl)-3-(4-nitrophenyl)propylamine  中文名：  分子式：C11H16N2O3  度：98.0%  兔組織因子   英文名稱：   Rabbit Tissue Factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   TF小鼠酶(CA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  L-Carnosine  中文名：L-肌肽  分子式：C9H14N4O3  度：99.0%

小鼠酶(CA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Flumequine sodium  中文名：氟甲喹鈉  分子式：C14H11FNNaO3 

小鼠卵清蛋白特異性IgE(OVAsIgE)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Felodipine  72509-76-3  中文名：非洛地平  分子式：C18H19Cl2NO4  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠卵清蛋白特異性IgE   英文名稱：   Mouse ovalbumin specific Immunoglobulin E   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   OVA sIgE  Fluorocytosine  中文名：  分子式：C4H4FN3O 

小鼠卵泡抑素(FS)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Felodipine  72509-76-3  中文名：非洛地平  分子式：C18H19Cl2NO4

小蛇菌屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒圖片Ganciclovir  中文名：更昔洛韋  分子式：C9H13N5O4    豬白介素13(IL-13)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Furosemide  中文名：  分子式：C12H11ClN2O5S    豬轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGF-β2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Furazolidone  中文名：呋喃唑酮  分子式：C8H7N3O5    豬E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISAkit   ELISA.   96T/48T           

Fumaric acid  中文名：  分子式：C4H4O4    豬可溶性P選擇素(sP-Selectin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Fudosteine  中文名：福多斯坦  分子式：C6H13NO3S    豬白介素17(IL-17)ELISAKit   ELISA.   96T/48T