PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務：

簡介：實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f兔子紅細胞生成素(EPO)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  (-)-Noe's Reagent  108031-79-4  中文名：(-)-核歐沃豪斯效應試劑  分子式：C24H38O3  度：98.0%   

兔子骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  7-Amino-4-methylcoumarin  中文名：7-氨基-4-甲基香豆素  分子式：C10H9NO2  度：98.0%

兔子骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  9-Oxooctadeca-10,12-dienoic acid  中文名：  分子式：C18H30O3  度：95.0%

兔子骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  ((2-cyclopropyl-4-(4-fluorophenyl)quinolin-3-yl)methyl)triphenylphosphonium bromide  中文名：  分子式：C37H30BrFNP  度：98.0%

兔子睪酮(T)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Chloramphenicol  中文名：氯霉素  分子式：C11H12Cl2N2O5  度：98.0%  豚鼠降鈣素基因相關肽(CGRP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Ganciclovir  中文名：更昔洛韋  分子式：C9H13N5O4  度：98.0%  豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Oxiracetam  中文名：奧拉西坦  分子式：C6H10N2O3  度：98.0%  豚鼠基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Piracetam  中文名：吡拉西坦  分子式：C6H10N2O2  度：98.0%  豚鼠鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Fudosteine  中文名：福多斯坦  分子式：C6H13NO3S  度：98.0%  豚鼠肝細胞生長因子(HGF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝小鼠尿激酶elisa試劑盒   小鼠尿激酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠尿激酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠尿激酶試劑盒、小鼠尿激酶elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  N-(2-Hydroxyethyl)-3-(4-nitrophenyl)propylamine  130634-09-2  中文名：  分子式：C11H16N2O3  度：98.0%  關鍵詞： 

小鼠尿蛋白（UP）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Fmoc-O-(benzylphospho)-L-threonine  175291-56-2  中文名：Fmoc-蘇氨酸磷酸芐酯  分子式：C26H26NO8P 

小鼠鳥酸脫羧酶   英文名稱：   Mouse Ornithine Decarboxylase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ODC  Fluorocytosine  中文名：  分子式：C4H4FN3O  度：98.0%

小鼠黏膜選擇素黏附分子1   英文名稱：   Mouse Mucosal Vascular Addressin Cell Adhesion Molecule 1   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   MADCAM-1  Linderaspirone A  1235126-46-1  中文名：  分子式：C34H32O10 

小鼠內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素(visfatin)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Flumethasone  中文名：氟米松  分子式：C22H28F2O5  度：98.0%

馬疥螨探針法熒光定量PCR試劑盒運輸Glycodeoxycholic acid  中文名：甘氨脫氧膽酸  分子式：C26H43NO5  度：98.0%  兔熱休克蛋白40(HSP-40)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Sodium cholate  中文名：膽酸鈉  分子式：C24H39NaO5  度：98.5%  兔熱休克蛋白20(HSP-20)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Chenodeoxycholic acid  中文名：鵝去氧膽酸  分子式：C24H40O4  度：99.0%  兔β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Dioscin  中文名：薯蕷皂苷  分子式：C45H72O16  度：98.5%  兔熱休克蛋白40(HSP-40)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Pseudoprotodioscin  中文名：偽原薯蕷皂苷  分子式：C51H82O21  度：98.0%  兔熱休克蛋白20(HSP-20)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項：

馬疥螨探針法熒光定量PCR試劑盒運輸1．基礎程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應液的配制；

6．PCR技術的基本原理；

7．PCR的反應動力學；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應體系與反應條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。