PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實(shí)現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f兔子髓0脂堿性蛋白(MBP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  9-Hydroxy-α-lapachone  22333-58-0  中文名：  分子式：C15H14O4  度：96.0%  關(guān)鍵詞：  梓樹; 萘醌; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

兔子髓0脂堿性蛋白(MBP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  1-Actamido-3,5-dimethyladmantane  19982-07-1  中文名：  分子式：C14H23NO  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

兔子雙氫睪elisa試劑盒   兔子雙氫睪試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子雙氫睪試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子雙氫睪試劑盒、兔子雙氫睪eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     Acetylatractylodinol  中文名：乙酰蒼術(shù)素醇  分子式：C15H12O3 

兔子瘦素(LEP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  9-Methoxy-α-lapachone  中文名：  分子式：C16H16O4  度：%

兔子瘦素(LEP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  1'-Acetonaphthone  中文名：1'-萘乙酮  分子式：C12H10O  度：98.0%

Ranolazine dihydrochloride  中文名：鹽酸雷諾嗪  分子式：C24H35Cl2N3O4  度：98.0%  血清總膽固醇（TC）含量測試盒   可見分光光度法   50管/48樣           

Cilnidipine  中文名：西尼地平  分子式：C27H28N2O7  度：98.0%  纖維蛋白原 (Fibrinogen)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Gefitinib  中文名：吉非替尼  分子式：C22H24ClFN4O3  度：98.0%  人 Foxp3(Foxp3)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Erlotinib  中文名：埃羅替尼  分子式：C22H23N3O4  度：98.0%  半乳糖凝集素 7 （ Galectin-7 ）   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

2-Flurbiprofen  中文名：氟比洛芬  分子式：C15H13FO2  度：98.0%  胃泌素 (Gasin)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝小鼠生長激素釋放多肽(GHRP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Indometacin  中文名：吲哚美辛  分子式：C19H16ClNO4  度：98.0%

小鼠生長激素（GH）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Irbesartan  中文名：厄貝沙坦  分子式：C25H28N6O 

小鼠生長分化因子6   英文名稱：   Mouse Growth Differeiation Factor 6   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   GDF-6  Danshenxinkun A  中文名：丹參新醌甲  分子式：C18H16O4 

小鼠生長分化因子3   英文名稱：   Mouse Growth Differeiation Factor 3   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   GDF3  Danshenxinkun A  中文名：丹參新醌甲  分子式：C18H16O4  度：98.0%

小鼠生長分化因子15   英文名稱：   Mouse Growth Differeiation Factor 15   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   GDF-15  Dantron  117-10-2  中文名：1,8-二羥基蒽醌  分子式：C14H8O4

莫氏立克次體探針法熒光定量PCR試劑盒說明書HumanCompleme4,C4ELISAKit 人補(bǔ)體蛋白4(C4)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  17α-Neriifolin  7044-31-7  中文名：  分子式：C30H46O8  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  海芒果; 強(qiáng)心苷; 甾苷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

HumanCompleme3,C3ELISAKit 人補(bǔ)體蛋白3(C3)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  17β-Hydroxy-17-methylandrosta-4,9(11)-dien-3-one  1039-17-4  中文名：17β-羥基-17-甲基雄甾-4,9(11)-二烯-3-酮  分子式：C20H28O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

HumanCathepsinAibodies,CathAbELISAKit 人組織蛋白酶抗體(CathAb)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  2,2-Diphenylglycine  3060-50-2  中文名：  分子式：C14H13NO2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

HumanCaspase-9,Casp-9ELISAKit 人胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  11-Hydroxyjasmonic acid  中文名：  分子式：C12H18O4  度：95.0%

Humancarbonicanhydrase,CAELISAKit 人酶(CA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝  1-Chloroethyl cyclohexyl carbonate  中文名：  分子式：C9H15ClO3  度：98.0%

注意事項(xiàng)：

莫氏立克次體探針法熒光定量PCR試劑盒說明書1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。