PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標(biāo)準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標(biāo)準。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f兔子胰島素樣生長因子2elisa試劑盒   兔子胰島素樣生長因子2試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子胰島素樣生長因子2試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子胰島素樣生長因子2試劑盒、兔子胰島素樣生長因子2eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Adenosine 5'-monophosphate  中文名：5'-腺嘌呤核苷酸  分子式：C10H14N5O7P  度：98.0%

兔子胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  5-Benzoylpentanoic acid  4144-62-1  中文名：5-苯甲?；焖?/span>  分子式：C12H14O3 

兔子胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  1-O-Methylnataloe-emodin  中文名：  分子式：C16H12O5  度：98.0%

兔子胰島素樣生長因子1elisa試劑盒   兔子胰島素樣生長因子1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子胰島素樣生長因子1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔子胰島素樣生長因子1試劑盒、兔子胰島素樣生長因子1eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Adipic dihydrazide  1071-93-8  中文名：己二酸二  分子式：C6H14N4O2 

兔子胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Adenosine 5'-monophosphate  61-19-8  中文名：5'-腺嘌呤核苷酸  分子式：C10H14N5O7P  度：98.0%  關(guān)鍵詞：

17-Acetyloxy-6-chloro-1α-chloromethylpregna-4,6-diene-3,20-dione  中文名：醋酸環(huán)丙氯地孕酮  分子式：C24H30Cl2O4  度：98.0%  小鼠Pleioophin（mouse Pleioophin）   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝  

17-Hydroxy-1a,2a-methylenepregna-4,6-diene-3,20-dione acetate  中文名：  分子式：C24H30O4  度：98.0%  小鼠6前列腺素(6-K-PG)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

4-(Phenylthio)benzyl alcohol  中文名：  分子式：C13H12OS  度：98.0%  小鼠5羥色胺(5-HT)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Fenticonazole nitrate  中文名：硝酸芬替康唑  分子式：C24H21Cl2N3O4S  度：98.0%  小鼠5核苷酸酶(5-)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

2-Fluoroadenosine  中文名：  分子式：C10H12FN5O4  度：98.0%  小鼠Ⅳ型膠原(ColⅣ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝小鼠酸性0酸酶elisa試劑盒   小鼠酸性0酸酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠酸性0酸酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠酸性0酸酶試劑盒、小鼠酸性0酸酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Lansoprazole  中文名：蘭索拉唑  分子式：C16H14F3N3O2S  度：98.0%

小鼠素(Renin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Fexofenadine hydrochloride  153439-40-8  中文名：鹽酸非索非那定  分子式：C32H40ClNO4 

小鼠廋素受體   英文名稱：   Leptin receptor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   Leptin R  Labetalol hydrochloride  中文名：鹽酸拉貝洛爾  分子式：C19H25ClN2O3 

小鼠廋素   英文名稱：   Leptin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   Leptin  Labetalol hydrochloride  中文名：鹽酸拉貝洛爾  分子式：C19H25ClN2O3  度：98.0%

小鼠松弛素   英文名稱：   Mouse Relaxin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   RLN  Latinone  79157-36-1  中文名：  分子式：C22H16O5

瑞氏絳蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明書Humandynorphin,DynELISA試劑盒人強啡肽(Dyn)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1,5,15-Tri-O-methylmorindol  中文名：  分子式：C18H16O6 

Humandynamin2,DNM2ELISA試劑盒人發(fā)動蛋白2(DNM2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1,6,2',3',6'-O-Pentaacetyl-3-O-trans-p-coumaroylsucrose  138213-63-5  中文名：  分子式：C31H38O18 

Humandopamine-β-hydroxylase,DBHELISA試劑盒人多巴胺-β羥化酶(DBH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1,4-Benzodioxane-6-carboxylic acid  4442-54-0  中文名：1,4-苯并二氧六環(huán)-6-羧酸  分子式：C9H8O4 

Humandopaminedecarboxylase,DDCELISA試劑盒人多巴胺脫羧酶(DDC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1,6,2',6'-O-Tetraacetyl-3-O-trans-p-coumaroylsucrose  中文名：  分子式：C29H36O17 

HumandopamineD2receptor,D2RELISA試劑盒人多巴胺D2受體(D2R)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1,6-Dibromopyrene  27973-29-1  中文名：1,6-二溴芘  分子式：C16H8Br2

注意事項：

瑞氏絳蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒說明書1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。