PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實(shí)現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f豚鼠白介素22(IL-22)ELISA試劑盒 ，英文名： IL-22 ELISA Kit  2-Amino-6-ethoxybenzothiazole  中文名：2-氨基-6-乙氧基苯并噻唑  分子式：C9H10N2OS  度：99.0%

豚鼠白介素2(IL-2)ELISA試劑盒 ，英文名： IL-2 ELISA Kit  2-Amino-6-chloropurine  10310-21-1  中文名：2-氨基-6-氯嘌呤  分子式：C5H4ClN5  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

豚鼠白介素2(IL2)ELISA試劑盒 ，英文名： IL2 ELISA Kit  2-Amino-5-nitrothiazole  中文名：2-氨基-5-硝基噻唑  分子式：C3H3N3O2S  度：98.0%

豚鼠白介素1受體拮抗劑elisa試劑盒   豚鼠白介素1受體拮抗劑試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豚鼠白介素1受體拮抗劑試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豚鼠白介素1受體拮抗劑試劑盒、豚鼠白介素1受體拮抗劑elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     9-Anthracenylmethyl acrylate  中文名：丙烯酸-9-蒽甲酯  分子式：C18H14O2 

豚鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒 ，英文名： IL1Ra ELISA Kit  2-Amino-5-nitrobenzophenone  1775-95-7  中文名：2-氨基-5-硝基二苯甲酮  分子式：C13H10N2O3  度：98.0%

1-Cyclopropyl-6,7-difluoro-1,4-dihydro-8-methoxy-4-oxo-3-quinolinecarboxylic acid  中文名：  分子式：C14H11F2NO4  度：98.0%  兔子神經(jīng)生長因子elisa試劑盒   兔子神經(jīng)生長因子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔子神經(jīng)生長因子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔子神經(jīng)生長因子試劑盒、兔子神經(jīng)生長因子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

1-Cyclopropyl-6,7-difluoro-1,4-dihydro-8-methoxy-4-oxo-3-quinolinecarboxylic acid ethyl ester  中文名：  分子式：C16H15F2NO4  度：98.0%  小鼠GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Amorolfine  中文名：阿莫羅芬  分子式：C21H36ClNO  度：98.0%  小鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Xanthinol nicotinate  中文名：煙酸占替諾  分子式：C19H26N6O6  度：98.0%  小鼠上皮中性粒細(xì)胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Isosorbide dinitrate  中文名：硝酸異山梨酯  分子式：C6H8N2O8  度：98.0%  小鼠抗凝血酶Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T小鼠維生素C(VC)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Thevebioside  114586-47-9  中文名：  分子式：C36H56O13 

小鼠維生素B6(VB6)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Loxoprofen  中文名：洛索洛芬  分子式：C15H18O3  度：98.0%

小鼠維生素B12(VB12)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Losartan  中文名：氯沙坦  分子式：C22H23ClN6O  度：98.0%

小鼠維生素A(VA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Losartan  中文名：氯沙坦  分子式：C22H23ClN6O 

小鼠網(wǎng)膜素elisa試劑盒   小鼠網(wǎng)膜素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠網(wǎng)膜素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠網(wǎng)膜素試劑盒、小鼠網(wǎng)膜素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     Medetomidine hydrochloride  86347-15-1  中文名：鹽酸美托咪啶  分子式：C13H17ClN2

斯氏普羅威登斯菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書Humanpeptidylprolylisomerase(cyclophilin)-like1,PPIL1ELISAKit人肽酰脯氨酰異構(gòu)酶(親環(huán)蛋白)樣1(PPIL1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1,2-Benzanthraquinone  2498-66-0  中文名：1,2-苯并奎寧酮  分子式：C18H10O2 

HumanPeptidylprolylcis/ansisomerase,PPIELISAKit人肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶(PPI)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1,2,3,6-Tetra-O-galloyl-β-D-glucose  中文名：1,2,3,6-四-O-沒食子酰-β-D-葡萄糖  分子式：C34H28O22 

Humanpeptidoglycan,PGELISAKit人肽聚糖(PG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1,18-Octadecanediol  3155-43-9  中文名：  分子式：C18H38O2 

HumanPeptideγ,PγELISAKit人γ肽(Pγ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1-(4-(3-Chloropropoxy)-3-methoxyphenyl)ethanone  中文名：  分子式：C12H15ClO3 

HumanPeptideYYELISAKit人多肽YY(Peptide-YY)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  1-(2-Chloroacetyl)pyrrolidine-2-carbonitrile  207557-30-5  中文名：  分子式：C7H9ClN2O

注意事項(xiàng)：

斯氏普羅威登斯菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。