PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

馬內(nèi)菲青霉探針法熒光定量PCR試劑盒圖片熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實(shí)現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Benactyzine hydrochloride  57-37-4  中文名：鹽酸貝那替嗪  分子式：C20H26ClNO3 

小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Loxoprofen  68767-14-6  中文名：洛索洛芬  分子式：C15H18O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽elisa試劑盒   小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽試劑盒、小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     Benactyzine hydrochloride  中文名：鹽酸貝那替嗪  分子式：C20H26ClNO3 

小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Bathophenanthroline  中文名：紅菲繞啉  分子式：C24H16N2  度：98.0%

小鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Benzenesulfonic acid  1998/11/3  中文名：苯磺酸  分子式：C6H6O3S  度：98.0%  關(guān)鍵詞：

Benzoyleneurea  中文名：亞苯甲?；?/span>  分子式：C8H6N2O2  度：98.0%  小鼠激酶(PK)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

N-Benzylmaleimide  中文名：N-芐基馬來酰亞胺  分子式：C11H9NO2  度：98.0%  小鼠的牛血清白蛋白殘留檢測ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Benzyl nicotinate  中文名：煙酸芐酯  分子式：C13H11NO2  度：98.0%  小鼠標(biāo)志物(CA724)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

(R)-(+)-1,1'-Bi-2-naphthol  中文名：(R)-(+)-1,1'-聯(lián)-2-萘酚  分子式：C20H14O2  度：98.0%  小鼠凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

5-Benzyl L-glutamate  中文名：L-谷氨酸5-芐酯  分子式：C12H15NO4  度：98.0%  小鼠基轉(zhuǎn)移酶(ALT)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝小鼠胰島細(xì)胞抗體(ICA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  N-[2-Isopropylthiazol-4-ylmethyl(methyl)carbamoyl]-L-valine  中文名：  分子式：C14H23N3O3S  度：98.0%

小鼠胰島細(xì)胞抗體(ICA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Estradiol  中文名：雌二醇  分子式：C18H24O2 

小鼠胰島素自身抗體(IAA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  N-[2-Isopropylthiazol-4-ylmethyl(methyl)carbamoyl]-L-valine  中文名：  分子式：C14H23N3O3S 

小鼠胰島素自身抗體(IAA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Capecitabine-2',3'-cyclic carbonate  中文名：卡培他濱  分子式：C16H20FN3O7  度：98.0%

小鼠胰島素原elisa試劑盒   小鼠胰島素原試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠胰島素原試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠胰島素原試劑盒、小鼠胰島素原elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     Mizolastine  108612-45-9  中文名：咪唑司汀  分子式：C24H25FN6O

馬內(nèi)菲青霉探針法熒光定量PCR試劑盒圖片Lonidamine  中文名：氯尼達(dá)明  分子式：C15H10Cl2N2O2    豬傳染性胃腸炎病毒抗體（TGEV）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Lomefloxacin hydrochloride  中文名：鹽酸洛美沙星  分子式：C17H20ClF2N3O3    豬促卵泡素elisa試劑盒   豬促卵泡素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬促卵泡素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬促卵泡素試劑盒、豬促卵泡素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Lithocholic acid  中文名：石膽酸  分子式：C24H40O3    豬促甲狀腺素釋放激素elisa試劑盒   豬促甲狀腺素釋放激素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬促甲狀腺素釋放激素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬促甲狀腺素釋放激素試劑盒、豬促甲狀腺素釋放激素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Linderaspirone A  中文名：  分子式：C34H32O10    豬雌二醇受體elisa試劑盒   豬雌二醇受體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬雌二醇受體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬雌二醇受體試劑盒、豬雌二醇受體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Lincomycin hydrochloride  中文名：鹽酸林可霉素  分子式：C18H35ClN2O6S    豬傳染性胃腸炎病毒抗體elisa試劑盒   豬傳染性胃腸炎病毒抗體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬傳染性胃腸炎病毒抗體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬傳染性胃腸炎病毒抗體試劑盒、豬傳染性胃腸炎病毒抗體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

注意事項(xiàng)：

1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。