概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

注意事項：

1．基礎(chǔ)程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點擊了解更公司產(chǎn)品。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

幼蟲芽孢桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書簡介：實時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結(jié)果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結(jié)果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f小鼠MCP-3(mouse MCP-3)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝     Clemastine fumarate  中文名：富馬酸氯馬斯汀  分子式：C25H30ClNO5 

小鼠L選擇素elisa試劑盒   小鼠L選擇素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠L選擇素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠L選擇素試劑盒、小鼠L選擇素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     Benzyl L-(+)-mandelate  中文名：L-(+)-扁桃酸芐酯  分子式：C15H14O3 

小鼠L選擇素(L-Selectin/CD62L)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Benzyl carbazate  5331-43-1  中文名：肼基甲酸芐酯  分子式：C8H10N2O2  度：98.0%   

小鼠L苯解酶(PAL)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Benzyl carbazate  5331-43-1  中文名：肼基甲酸芐酯  分子式：C8H10N2O2 

小鼠KN-62ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Benzyl carbamate  中文名：氨基甲酸芐酯  分子式：C8H9NO2  度：98.0%

3,3-Dimethoxy-5α-androstan-17-one  中文名：3,3-二甲氧基-5α-雄烷-17-酮  分子式：C21H34O3  度：98.0%  小鼠催乳素(PRL)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

3-Ethoxyandrosta-3,5-dien-17β-ol  中文名：3-乙氧基雄-3,5-二烯-17β醇  分子式：C21H32O2  度：93.0%  小鼠大內(nèi)皮素(BigET)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

17-Ethylendioxyandrosta-1,4-dien-3-one  中文名：17-亞乙二氧基-雄-1,4-二烯-3-酮  分子式：C21H28O3  度：95.0%  小鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

3β-Acetoxy-5α-androstan-17β-ol  中文名：3-乙?；?/span>-5α-雄烷二醇  分子式：C21H34O3  度：98.0%  小鼠凝血因子Ⅸ(FⅨ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

17β-Benzoyloxy-androsta-1,4-dien-3-one  中文名：17β-苯甲酰氧基-雄甾-1,4-二烯-3-酮  分子式：C26H30O3  度：98.0%  小鼠凝血因子Ⅹ(FⅩ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T小鼠正常T細胞表達和分泌因子(RAES/CCL5)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Cilnidipine  中文名：西尼地平  分子式：C27H28N2O7 

小鼠正常T細胞表達elisa試劑盒   小鼠正常T細胞表達試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠正常T細胞表達試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠正常T細胞表達試劑盒、小鼠正常T細胞表達eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Linagliptin  668270-12-0  中文名：利拉利汀  分子式：C25H28N8O2  度：98.0%   

小鼠粘蛋白elisa試劑盒   小鼠粘蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠粘蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠粘蛋白試劑盒、小鼠粘蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Loperamide hydrochloride  中文名：鹽酸洛哌丁胺  分子式：C29H34Cl2N2O2 

小鼠粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Ergosterol peroxide glucoside  中文名：過氧化麥角甾醇葡萄糖苷  分子式：C34H54O8 

小鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Nandrolone undecylate  中文名：十一酸諾龍  分子式：C29H46O3  度：98.0%

幼蟲芽孢桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書Medetomidine hydrochloride  中文名：鹽酸美托咪啶  分子式：C13H17ClN2  度：98.0%  胃蛋白酶 1:3000   25g

Methyl 2,2-dithienylglycolate  中文名：  分子式：C11H10O3S2  度：98.0%  Pepsin1:3000,PorcineSource   100g

Tiotropium bromide  中文名：噻托溴銨  分子式：C19H22NO4S2  度：98.0%  胃蛋白酶抑制劑   5mg

4-(4-(5-(Aminomethyl)-2-oxooxazolidin-3-yl)phenyl)morpholin-3-one hydrochloride  中文名：  分子式：C14H18ClN3O4  度：98.0%  Pepstatin   25mg              

Lenalidomide  中文名：來那度胺  分子式：C13H13N3O3  度：98.0%  尾加壓素 II(Human Urotensin II)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進口分裝