PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針?lè)晒舛縋CR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度的變化來(lái)對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針?lè)?。通過(guò)對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來(lái)源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f小鼠癌標(biāo)志物CA125ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Brinzolamide  138890-62-7  中文名：布林佐胺  分子式：C12H21N3O5S3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠阿立新A(OrexinA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Bortezomib  179324-69-7  中文名：硼替佐米  分子式：C19H25BN4O4  度：98.0%   

小鼠γ基(GABA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Boldenone undecylenate  中文名：寶丹酮十一烯酸酯  分子式：C30H44O3 

小鼠γ基(GABA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Boldenone undecylenate  13103-34-9  中文名：寶丹酮十一烯酸酯  分子式：C30H44O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠γ干擾素誘導(dǎo)蛋白elisa試劑盒   小鼠γ干擾素誘導(dǎo)蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠γ干擾素誘導(dǎo)蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠γ干擾素誘導(dǎo)蛋白試劑盒、小鼠γ干擾素誘導(dǎo)蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Boldenone acetate  2363-59-9  中文名：寶丹酮醋酸酯  分子式：C21H28O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：

(R)-(+)-2-Amino-3-methyl-1,1-diphenyl-1-butanol  86695-06-9  中文名：(R)-(+)-2-氨基-3-甲基-1,1-二苯基-1-丁醇  分子式：C17H21NO  度：98.0%      小鼠高密度脂蛋白（HDL）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

(R)-(+)-1,1'-Bi-2-naphthol  18531-94-7  中文名：(R)-(+)-1,1'-聯(lián)-2-萘酚  分子式：C20H14O2  度：98.0%      小鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

(R)-(-)-4-Benzyl-3-propionyl-2-oxazolidinone  131685-53-5  中文名：(R)-(-)-4-芐基-3-丙?；?/span>-2-惡唑烷酮  分子式：C13H15NO3  度：98.0%      小鼠肝脂酶(HL)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

(2Z,6Z,10E,14E,18E)-Farnesylfarnesol  90695-03-7  中文名：  分子式：C30H50O  度：96.0%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)  小鼠肝炎病毒抗體（HV-Ab）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

(2R,3S)-3-Phenylisoserine ethyl ester  143615-00-3  中文名：  分子式：C11H15NO3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長(zhǎng)因子(SCF/MGF)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 165(VEGF165)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Otophylloside B 4'''-O-β-D-cymaropyranoside  中文名：  分子式：C56H90O19 

內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (VEGF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Androstanolone 17-benzoate  中文名：雄諾龍苯甲酸酯  分子式：C26H34O3  度：98.0%

緊張素轉(zhuǎn)化酶   英文名稱：   Angiotensin Conveing Enzyme   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ACE  Otophylloside B  中文名：青陽(yáng)參苷B  分子式：C49H78O16  度：97.0%

緊張素I(素、AngI)   96T/48T  Ornidazole  中文名：奧硝唑  分子式：C7H10ClN3O3  度：98.0%

緊張素Ⅱ一型受體抗原   英文名稱：   Angiotensin 2 Receptor 1 Aigen   英文縮寫：   AT1R   規(guī)格：   48T/96T  Ophiopogonin D  中文名：麥冬皂苷D  分子式：C44H70O16  度：%

奔馬赭霉探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒圖片Methylprednisolone hemisuccinate  2921-57-5  中文名：  分子式：C26H34O8    人周期素依賴性激酶4(CDK4)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒   Human CDK4 (Cyclin Depende Kinase 4) ELISA Kit

Methylprednisolone acetate  53-36-1  中文名：甲基潑尼松龍醋酸酯  分子式：C24H32O6    人周期素依賴性激酶5(CDK5)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒   Human CDK5 (Cyclin Depende Kinase 5) ELISA Kit              

11β,17α-Dihydroxy-6α-methylpregna-1,4-diene-3,20-dione  6870-94-6  中文名：  分子式：C22H30O4    人重組激活基因2elisa試劑盒   人重組激活基因2試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人重組激活基因2試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人重組激活基因2試劑盒、人重組激活基因2 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Methylprednisolone  83-43-2  中文名：甲基潑尼松龍  分子式：C22H30O5    人重組激活基因1elisa試劑盒   人重組激活基因1試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人重組激活基因1試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人重組激活基因1試劑盒、人重組激活基因1 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

17-Acetyloxy-6-chloro-1α-chloromethylpregna-4,6-diene-3,20-dione  17183-98-1  中文名：醋酸環(huán)丙氯地孕酮  分子式：C24H30Cl2O4    人重去甲上腺素elisa試劑盒   人重去甲上腺素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人重去甲上腺素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人重去甲上腺素試劑盒、人重去甲上腺素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

奔馬赭霉探針?lè)晒舛?/span>PCR試劑盒圖片1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。