概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實(shí)現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

注意事項(xiàng)：

1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

西方蜜蜂微孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒圖片簡介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f小鼠白介素1(IL-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Candesartan cilexetil  145040-37-5  中文名：坎地沙坦西來替昔酯  分子式：C33H34N6O6 

小鼠白介素1(IL-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Candesartan  139481-59-7  中文名：坎地沙坦  分子式：C24H20N6O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠白介素 -7(mouse IL-7)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 R&D  Cabozantinib  中文名：卡博替尼  分子式：C28H24FN3O5  度：98.0%

小鼠白介素 -6 (mouse IL-6)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   法國 Diaclone  Campsiketalin  93675-96-8  中文名：  分子式：C10H20O4 

小鼠白介素 -5 (mouse IL-5)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 Biosource  Campsiketalin  93675-96-8  中文名：  分子式：C10H20O4  度：95.0%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

1,2-Benzanthraquinone  2498-66-0  中文名：1,2-苯并奎寧酮  分子式：C18H10O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠孤兒受體配體   英文名稱：   Mouse Aemin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   A

1,2,3-Triacetyl-5-deoxy-D-ribose  62211-93-2  中文名：  分子式：C11H16O7  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠α葡萄糖苷酶   英文名稱：   Mouse α Glucosidase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   AG

1,2,3,6-Tetra-O-galloyl-β-D-glucose  79886-50-3  中文名：1,2,3,6-四-O-沒食子酰-β-D-葡萄糖  分子式：C34H28O22  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠雄激素   英文名稱：   Mouse Androgen   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ADG

1,18-Octadecanediol  3155-43-9  中文名：  分子式：C18H38O2  度：90.0%  關(guān)鍵詞：  中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  酰基輔酶A氧化酶   英文名稱：   Mouse Acyl-CoA oxidase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ACO

1-(4-Fluorobenzyl)-2-chlorobenzimidazole  84946-20-3  中文名：  分子式：C14H10ClFN2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠鉤端螺旋體IgGelisa試劑盒   小鼠鉤端螺旋體IgG試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠鉤端螺旋體IgG試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠鉤端螺旋體IgG試劑盒、小鼠鉤端螺旋體IgGeisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。生成素 -2(Angiopoietin-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Oxiracetam  中文名：奧拉西坦  分子式：C6H10N2O3  度：98.0%

內(nèi)皮抑素 (Endostatin)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Oxandrolone  中文名：氧甲氫龍  分子式：C19H30O3  度：98.0%

內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子 -1(VCAM-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Androstanolone acetate  1164-91-6  中文名：雄諾龍醋酸酯  分子式：C21H32O3 

內(nèi)皮生長因子受體3   英文名稱：   vascuiar endothelial growth factor receptor 3   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   VEGF-R3  Otophylloside T  中文名：  分子式：C48H70O18 

內(nèi)皮生長因子受體2   英文名稱：   vascuiar endothelial growth factor receptor 2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   VEGF-R2  Otophylloside T  中文名：  分子式：C48H70O18  度：98.0%

西方蜜蜂微孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒圖片Minisecolide C  中文名：  分子式：C28H34O7    豬白介素17(IL-17)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Miconazole nitrate  中文名：硝酸咪康唑  分子式：C18H15Cl4N3O4    豬白介素12（IL-12）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Metronidazole  中文名：甲硝唑  分子式：C6H9N3O3    豬白介素10(IL-10)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Metoclopramide  中文名：甲氧氯普胺  分子式：C14H22ClN3O2    豬白介素1(IL-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Methyltestosterone  中文名：甲基睪酮  分子式：C20H30O2    豬白介素1β(IL-1β)ELISAKit   ELISA.   96T/48T