PCR實驗方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產物不斷積累，熒光信號也會相應的增加，這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應進行實時的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務：

簡介：實時熒光定量PCR技術于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術不僅實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實驗結果等。我公司為您提供全套實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設計與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉錄成cDNA。

（03）進行Real Time PCR實驗，進行實驗結果分析。

（04）實驗完成后，提供完整的實驗報告（含軟件分析結果）及引物等實驗材料。

3、熒光定量PCR的收費標準：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進行不同的收費標準。

以下是公司正在熱銷產品產品：

fGriseofulvin  中文名：灰黃霉素  分子式：C17H17ClO6  度：98.0%  小鼠FMS樣酪酸激酶elisa試劑盒   小鼠FMS樣酪酸激酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠FMS樣酪酸激酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠FMS樣酪酸激酶試劑盒、小鼠FMS樣酪酸激酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Androst-5-en-3-ol-7,17-dione acetate  中文名：7-酮基去氫表雄酮醋酸酯  分子式：C21H28O4  度：98.0%  小鼠FMS樣酪酸激酶3配體elisa試劑盒   小鼠FMS樣酪酸激酶3配體試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠FMS樣酪酸激酶3配體試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠FMS樣酪酸激酶3配體試劑盒、小鼠FMS樣酪酸激酶3配體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

7-Keto-dehydroepiandrosterone  中文名：7-酮基去氫表雄酮  分子式：C19H26O3  度：98.0%  小鼠N-乙?；?/span>-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸elisa試劑盒   小鼠N-乙酰基-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠N-乙?；?/span>-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠N-乙?；?/span>-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸試劑盒、小鼠N-乙?；?/span>-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

Sodium prasterone sulfate  中文名：去氫表雄酮硫酸鈉鹽  分子式：C19H27NaO5S  度：98.0%  小鼠Slit2elisa試劑盒   小鼠Slit2試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠Slit2試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠Slit2試劑盒、小鼠Slit2eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  

Dehydroepiandrosterone enanthate  中文名：普拉雄酮庚酸酯  分子式：C26H40O3  度：98.0%  小鼠FMS樣酪酸激酶3配體(Flt3L)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豚鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Allylestrenol  中文名：烯丙雌醇  分子式：C21H32O  度：98.0%

豚鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Allylestrenol  432-60-0  中文名：烯丙雌醇  分子式：C21H32O  度：98.0%  關鍵詞： 

豚鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝  2-Amino-5-chlorobenzophenone  中文名：2-氨基-5-氯二苯甲酮  分子式：C13H10ClNO  度：99.0%

豚鼠白介素1β(IL1β)ELISA試劑盒 ，英文名： IL1β ELISA Kit  2-Amino-4-phenylphenol  1134-36-7  中文名：2-氨基-4-苯基苯酚  分子式：C12H11NO  度：98.0%  關鍵詞： 

豚鼠白介素1β(IL1B)ELISA試劑盒 ，英文名： IL1B ELISA Kit  2-Amino-4'-fluorobenzophenone  中文名：  分子式：C13H10FNO  度：98.0%小鼠乙型肝炎病毒表面抗體   英文名稱：   Mouse Hepatitis B surface Aibody   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   HBsAb  Ethyl β-D-apiofuranoside  1932405-61-2  中文名：  分子式：C7H14O5 

小鼠乙型肝炎表面抗原elisa試劑盒   小鼠乙型肝炎表面抗原試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠乙型肝炎表面抗原試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠乙型肝炎表面抗原試劑盒、小鼠乙型肝炎表面抗原elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  N4-Benzoylcytosine  中文名：N4-苯甲?；奏?/span>  分子式：C11H9N3O2  度：98.0%

小鼠乙型肝炎表面抗體(HBsAb)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  N4-Benzoylcytidine  中文名：N4-苯甲酰胞苷  分子式：C16H17N3O6  度：98.0%

小鼠乙型肝炎表面抗體(HBsAb)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  N4-Benzoyl-2'-deoxycytidine  4836-13-9  中文名：N4-苯甲?；?/span>-2'-脫氧胞苷  分子式：C16H17N3O5  度：98.0%   

小鼠乙型肝炎e抗原elisa試劑盒   小鼠乙型肝炎e抗原試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠乙型肝炎e抗原試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產品別名：小鼠乙型肝炎e抗原試劑盒、小鼠乙型肝炎e抗原elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。  N4-Benzoylcytosine  中文名：N4-苯甲酰基胞嘧啶  分子式：C11H9N3O2

田鼠分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書Lynestrenol  52-76-6  中文名：利奈孕醇  分子式：C20H28O    豚鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒 ，英文名： IL1Ra ELISA Kit

Norethindrone  68-22-4  中文名：炔諾酮  分子式：C20H26O2    Human ubiquitin activating enzyme (E1/UBAE) ELISA Kit 人泛素激活酶(E1/UBAE)ELISA試劑盒

Allylestrenol  432-60-0  中文名：烯丙雌醇  分子式：C21H32O    rabbitIerleukin4,IL-4ELISAKit 兔子白介素4(IL-4)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

Estradiol-3-benzoate-17-butyrate  63042-18-2  中文名：雌二醇-3-苯甲酸-17-丁酸酯  分子式：C29H34O4    CLIAKitforBeta-CG(MouseChorionicGonadoophinBeta)ELISAKit小鼠絨毛膜促性腺激素β規(guī)格：48T/96T

Estradiol hexahydrobenzoate  15140-27-9  中文名：環(huán)己甲酸雌二醇  分子式：C25H34O3    細菌乙醇比色法定量檢測試劑盒20次

注意事項：

田鼠分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書1．基礎程序；

2．擴增溫度和延伸溫度；

3．反應時間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應液的配制；

6．PCR技術的基本原理；

7．PCR的反應動力學；

8．PCR擴增產物；

9．PCR反應體系與反應條件。點擊了解更公司產品。