PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實(shí)現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f(R)-(-)-4-Benzyl-3-propionyl-2-oxazolidinone  中文名：(R)-(-)-4-芐基-3-丙酰基-2-惡唑烷酮  分子式：C13H15NO3  度：98.0%  小鼠結(jié)締組織生長因子   英文名稱：   Mouse Connective Tissue Growth Factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   CTGF

N-Benzoyl-L-tyrosine ethyl ester  中文名：N-苯甲?；?/span>-L-酪氨酸乙酯  分子式：C18H19NO4  度：98.0%  小鼠皮質(zhì)   英文名稱：   Mouse Coicosterone   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   CO

O-Benzyl-L-serine  中文名：O-芐基-L-絲氨酸  分子式：C10H13NO3  度：98.0%  小鼠肌酐   英文名稱：   Mouse Creatinine   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   CT

S-Benzyl-L-cysteine  中文名：S-芐基-L-半胱氨酸  分子式：C10H13NO2S  度：98.0%  小鼠補(bǔ)體1抑制物抗體(C1INH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Benzoyl-DL-valine  中文名：苯甲酰-DL-纈氨酸  分子式：C12H15NO3  度：98.0%  小鼠脫氫酶E1(PDHE1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠apelin12(AP12)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Benzimidazole  51-17-2  中文名：苯并咪唑  分子式：C7H6N2 

小鼠apelin12(AP12)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Erythritol  149-32-6  中文名：赤蘚糖醇  分子式：C4H10O4 

小鼠Active Caspase-8   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     Cleroindicin D  中文名：  分子式：C8H12O4 

小鼠Active Caspase-7   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Cleroindicin D  中文名：  分子式：C8H12O4  度：97.0%

小鼠Active Caspase-3   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Cleroindicin E  165197-71-7  中文名：  分子式：C8H14O3氧化酶   英文名稱：   Human Xahione oxidase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   XOD  Androst-5-ene-3β,17β-diol 3,17-diacetate  中文名：雄甾-5-烯-3β,17β-二醇 3,17-二乙酸酯  分子式：C23H34O4  度：98.0%

氧化低密度脂蛋白   英文名稱：   oxidized low density lipoprotein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   OxLDL  Qingyangshengenin 3-O-β-D-cymaropyranosyl-(1→4)-β-D-digitoxopyranoside  1186628-87-4  中文名：  分子式：C41H58O14 

羊孕激素/孕(PROG)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           α-Spinasterol acetate  4651-46-1  中文名：α-菠甾醇乙酸酯  分子式：C31H50O2 

羊階段特異性表面抗原-1elisa試劑盒   羊階段特異性表面抗原-1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   羊階段特異性表面抗原-1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：羊階段特異性表面抗原-1試劑盒、羊階段特異性表面抗原-1eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Piracetam  中文名：吡拉西坦  分子式：C6H10N2O2  度：98.0%

羊促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Pioglitazone hydrochloride  中文名：鹽酸吡格列酮  分子式：C19H21ClN2O3S  度：98.0%

巨球菌探針法熒光定量PCR試劑盒圖片N6-Benzoyladenine  4005-49-6  中文名：N6-苯甲酰基腺嘌呤  分子式：C12H9N5O  度：98.0%      小鼠細(xì)胞膜表面球蛋白(SmIg)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

N6-Benzoyl-5'-O-(4,4'-dimethoxytrityl)-2'-deoxyadenosine  64325-78-6  中文名：N6-苯甲?；?/span>-5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-2'-脫氧腺苷  分子式：C38H35N5O6  度：98.0%      小鼠細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

N4-Benzoylcytosine  26661-13-2  中文名：N4-苯甲?；奏?/span>  分子式：C11H9N3O2  度：98.0%      小鼠細(xì)胞色素P450(mouse Cytochrome P450)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

N4-Benzoylcytidine  13089-48-0  中文名：N4-苯甲酰胞苷  分子式：C16H17N3O6  度：98.0%      小鼠C反應(yīng)蛋白(mouse CRP)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

N4-Benzoyl-2'-deoxycytidine  4836-13-9  中文名：N4-苯甲?；?/span>-2'-脫氧胞苷  分子式：C16H17N3O5  度：98.0%      小鼠CXC趨化因子受體3(mouse CXCR3)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

注意事項(xiàng)：

巨球菌探針法熒光定量PCR試劑盒圖片1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。