PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

fPeri acid  中文名：周位酸  分子式：C10H9NO3S  度：98.0%  小鼠雌激素(E)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

6-Aminouracil  中文名：6-氨基尿嘧啶  分子式：C4H5N3O2  度：98.0%  小鼠雌二醇受體(ER)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

4-Aminosalicylic acid  中文名：4-氨基水楊酸  分子式：C7H7NO3  度：98.0%  小鼠雌二醇(E2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

3-Amino-1-phenyl-2-pyrazolin-5-one  中文名：3-氨基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮  分子式：C9H9N3O  度：98.0%  小鼠穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

2-Amino-5-nitrothiazole  中文名：2-氨基-5-硝基噻唑  分子式：C3H3N3O2S  度：98.0%  小鼠雌二醇(E2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠CXC趨化因子受體elisa試劑盒   小鼠CXC趨化因子受體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠CXC趨化因子受體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠CXC趨化因子受體試劑盒、小鼠CXC趨化因子受體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Benzotetramisole  885051-07-0  中文名：苯并四咪唑  分子式：C15H12N2S 

小鼠CXC趨化因子受體3(mouse CXCR3)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Marsdenoside F  858360-61-9  中文名：  分子式：C39H60O14  度：%  關(guān)鍵詞：  通光散; 孕甾烷; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

小鼠CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Benzophenone  119-61-9  中文名：二苯甲酮  分子式：C13H10O  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠CXC趨化因子受體3   英文名稱：   CXC chemokine receptor 3   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   CXCR3  Benzopinacol  464-72-2  中文名：苯頻哪醇  分子式：C26H22O2 

小鼠CXC趨化因子配體elisa試劑盒   小鼠CXC趨化因子配體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠CXC趨化因子配體試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠CXC趨化因子配體試劑盒、小鼠CXC趨化因子配體eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Benzopinacol  中文名：苯頻哪醇  分子式：C26H22O2  度：98.0%乙醇酸氧化酶測(cè)試盒   可見分光光度法   50管/48樣  Prasugrel  中文名：普拉格雷  分子式：C20H20FNO3S  度：98.0%

胰腺再生蛋白1a   英文名稱：   Human Regenerating Islet Derived Protein 1a   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   REG1a  4-[(4-Methylpiperazin-1-yl) methyl]benzoic acid dihydrochloride  中文名：甲磺酸伊馬替尼  分子式：C13H20Cl2N2O2  度：98.0%

胰高血糖素   英文名稱：   Glucagon   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   GC  3-Methylamino-1-(2-thienyl)-1-propanol  中文名：  分子式：C8H13NOS 

胰島素原   英文名稱：   Proinsulin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   PINS  O-Benzyl-L-serine  4726-96-9  中文名：O-芐基-L-絲氨酸  分子式：C10H13NO3  度：98.0%   

胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白5   英文名稱：   human Insulin like Growth Factor Binding Protein 5   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   IGFBP5  Pramipexole dihydrochloride  中文名：鹽酸普拉克索  分子式：C10H19Cl2N3S  度：98.0%

羅布羅布芽生菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書N-Acetyl-L-tryptophan  中文名：N-乙酰-L-色氨酸  分子式：C13H14N2O3    豬Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

N-Acetyl-D-tryptophan  中文名：N-乙酰基-D-色氨酸  分子式：C13H14N2O3    植物玉米素核苷(ZR)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

N-Acetylcaprolactam  中文名：N-乙酰己內(nèi)酰胺  分子式：C8H13NO2    植物玉米素(Z)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

N-Acetyl-5-hydroxytryptamine  中文名：N-乙酰基-5-羥基色胺  分子式：C12H14N2O2    豬Ⅲ型膠原elisa試劑盒   豬Ⅲ型膠原試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬Ⅲ型膠原試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬Ⅲ型膠原試劑盒、豬Ⅲ型膠原eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

N-6-Methyl-7,7-dioxo-2-sulfamoyl-5,6-dihydro-4H-thieno[2,3-b]thiopyran-4-yl]acetamide  中文名：  分子式：C10H14N2O5S3    植物維生素B6elisa試劑盒   植物維生素B6試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   植物維生素B6試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：植物維生素B6試劑盒、植物維生素B6eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

羅布羅布芽生菌探針法熒光定量PCR試劑盒說明書1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。