PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實(shí)現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

fAminophenazone  中文名：氨基比林  分子式：C13H17N3O  度：98.0%  小鼠促上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Naproxen  中文名：萘普生  分子式：C14H14O3  度：98.0%  小鼠促性腺激素釋放激素   英文名稱：   Mouse Gonadoopin-Releasing Hormone   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   GH

Chlorpheniramine maleate  中文名：馬來酸氯苯那敏  分子式：C20H23ClN2O4  度：98.0%  小鼠葡萄糖氧化酶   英文名稱：   Mouse Glucose Oxidase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   GOD

2-Aminoisonicotinic acid  中文名：2-氨基異煙酸  分子式：C6H6N2O2  度：98.0%  小鼠胰高血糖素   英文名稱：   Mouse Glucagon   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   GC

5-Aminoindole  中文名：5-氨基吲哚  分子式：C8H8N2  度：98.0%  小鼠葡萄糖60酸脫氫酶   英文名稱：   Mouse Glucose 6 Phosphate Dehydrogenase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   G6PD

小鼠FMS樣酪酸激酶3配體(Flt3L)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Benzoyl-DL-valine  2901-80-6  中文名：苯甲酰-DL-纈氨酸  分子式：C12H15NO3  度：98.0%   

小鼠FMS樣酪酸激酶3(Flt3)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Benzoyl-DL-valine  2901-80-6  中文名：苯甲酰-DL-纈氨酸  分子式：C12H15NO3 

小鼠FMS樣酪酸激酶3(Flt3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Estra-4,9-diene-3,17-dione  5173-46-6  中文名：甲基雙烯雙酮  分子式：C18H22O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠Flt3配體   英文名稱：   Fms-related tyrosine kinase-3 Ligand   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   Flt3 Ligand  Memantine hydrochloride  41100-52-1  中文名：鹽酸美金剛胺  分子式：C12H22ClN  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠Flt3(mouse Flt3)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     Lafutidine  118288-08-7  中文名：拉呋替丁  分子式：C22H29N3O4S異育銀鯽白細(xì)胞間介素22   英文名稱：   Freshwater fish Ierleukin 22   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   IL-22  Pyrimethamine  58-14-0  中文名：乙胺嘧啶  分子式：C12H13ClN4 

異基-β-D-硫代半乳糖苷   10g  Pseudoprotodioscin  中文名：偽原薯蕷皂苷  分子式：C51H82O21  度：98.0%

乙型流感   英文名稱：   Influenza B HA   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   HA  Przewaquinone A  中文名：紫丹參甲素  分子式：C19H18O4  度：98.0%

乙型肝炎病毒s抗原   英文名稱：   Hepatitis B Virus surface aigen   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   HBsAg  Prosapogenin A  中文名：薯蕷次皂苷A  分子式：C39H62O12  度：%

乙型肝炎病毒s抗體   英文名稱：   Hepatitis B Virus surface aibody   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   HBsAb  Prosapogenin A  中文名：薯蕷次皂苷A  分子式：C39H62O12

沙氏住白細(xì)胞原蟲探針法熒光定量PCR試劑盒廠家Nandrolone decanoate  中文名：癸酸諾龍  分子式：C28H44O3    豬Ⅰ型前膠原羧基端肽elisa試劑盒   豬Ⅰ型前膠原羧基端肽試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   豬Ⅰ型前膠原羧基端肽試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：豬Ⅰ型前膠原羧基端肽試劑盒、豬Ⅰ型前膠原羧基端肽elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Nandrolone  中文名：諾龍  分子式：C18H26O2    植物維生素D2elisa試劑盒   植物維生素D2試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   植物維生素D2試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：植物維生素D2試劑盒、植物維生素D2 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Naftopidil dihydrochloride  中文名：鹽酸萘哌地爾  分子式：C24H30Cl2N2O3    人Dickkopf1elisa試劑盒   人Dickkopf 1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人Dickkopf 1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人Dickkopf 1試劑盒、人Dickkopf 1 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

Naftifine hydrochloride  中文名：鹽酸萘替芬  分子式：C21H22ClN    人CD14分子elisa試劑盒   人CD14分子試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人CD14分子試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人CD14分子試劑盒、人CD14分子elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  

N-Acetyl-L-tyrosine  中文名：乙酰酪氨酸  分子式：C11H13NO4    豬Ⅲ型膠原(ColⅢ)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

沙氏住白細(xì)胞原蟲探針法熒光定量PCR試劑盒廠家1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。