實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性極好，即同一模板不同時間擴(kuò)增或同一時間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。

外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性最好的定量方法，已得到全世界的公認(rèn)，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：碩大利什曼原蟲探針法熒光定量PCR試劑盒說明書

英文名稱：Leishmania major

貨號: GOY-M4167

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品運輸：低溫運輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品及特點:

是從土壤農(nóng)桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉(zhuǎn)基因植物研究中最為常用的一種篩選標(biāo)記基因，因此本公司根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據(jù) 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 保守區(qū)域設(shè)計引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的

鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分，但不能檢測其他非 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個檢測過程（按一個樣品計）所需時間僅為 2.0 小時。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

操作步驟：

下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規(guī)PCR 檢測試劑盒 (一步法)，具體產(chǎn)品操作以說明書為準(zhǔn)。

第1步：樣本處理：

第2步：試劑制備：

第3步：PCR體系建立：

第4步：啟動PCR反應(yīng)

第5步：電泳結(jié)果分析

191bp為內(nèi)控對照條帶，表明PCR反應(yīng)正常。

當(dāng)樣本存在支原體污染時，由于內(nèi)控對照與支原體DNA存在競爭，內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內(nèi)控對照條帶會完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結(jié)果。

如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ê完幮詫φ障啾龋?，此時應(yīng)先進(jìn)行DNA抽提（推薦使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標(biāo)記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設(shè)置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）

10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

f8-Bromo-7-(but-2-yn-1-yl)-3-methyl-1H-purine-2,6(3H,7H)-dione  中文名：  分子式：C10H9BrN4O2  度：98.0%  小鼠膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

2-(Chloromethyl)-4-methylquinazoline  中文名：  分子式：C10H9ClN2  度：98.0%  中文名稱   方法   規(guī)格

3-(Boc-Amino)piperidine  中文名：  分子式：C10H20N2O2  度：98.0%  小鼠促黃體激素(LH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Linagliptin  中文名：利拉利汀  分子式：C25H28N8O2  度：98.0%  小鼠緊張素原(aGT)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

Telmisartan tert-butyl ester  中文名：  分子式：C37H38N4O2  度：98.0%  小鼠膽固醇(CH)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠p53elisa試劑盒   小鼠p53試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠p53試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠p53試劑盒、小鼠p53eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Benzyl nicotinate  94-44-0  中文名：煙酸芐酯  分子式：C13H11NO2 

小鼠P53(P53-ab)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Benzyl nicotinate  中文名：煙酸芐酯  分子式：C13H11NO2  度：98.0%

小鼠p53(p53)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Benzyl nicotinate  中文名：煙酸芐酯  分子式：C13H11NO2 

小鼠p53(p53)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Enalapril maleate  76095-16-4  中文名：馬來酸依那普利  分子式：C24H32N2O9 

小鼠N-乙?；?/span>-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸elisa試劑盒   小鼠N-乙酰基-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠N-乙?；?/span>-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠N-乙?；?/span>-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸試劑盒、小鼠N-乙?；?/span>-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯酸eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  Benzoyl-DL-valine  中文名：苯甲酰-DL-纈氨酸  分子式：C12H15NO3  度：98.0%魚類白介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  α-Lapachone  中文名：  分子式：C15H14O3  度：98.0%

魚膠原交聯(lián)(PYD)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  α-Lapachone  中文名：  分子式：C15H14O3 

魚骨鈣素elisa試劑盒   魚骨鈣素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   魚骨鈣素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：魚骨鈣素試劑盒、魚骨鈣素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。  5-Aminouracil  中文名：5-氨基尿嘧啶  分子式：C4H5N3O2  度：98.0%

魚骨鈣素/骨谷酸蛋白(OT/BGP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  α-Lapachone  4707-33-9  中文名：  分子式：C15H14O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  萘醌; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

魚二(MDA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  α-Spinasterol acetate  4651-46-1  中文名：α-菠甾醇乙酸酯  分子式：C31H50O2  度：96.0%  關(guān)鍵詞：  豆甾烷; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

碩大利什曼原蟲探針法熒光定量PCR試劑盒說明書N-Boc-O-Benzyl-D-serine  47173-80-8  中文名：N-Boc-O-芐基-D-絲氨酸  分子式：C15H21NO5  度：98.0%      小鼠纖溶酶/纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

N-Benzylmaleimide  1631-26-1  中文名：N-芐基馬來酰亞胺  分子式：C11H9NO2  度：98.0%      小鼠纖連蛋白(FN)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

N-Benzoyl-L-tyrosine ethyl ester  3483-82-7  中文名：N-苯甲酰基-L-酪氨酸乙酯  分子式：C18H19NO4  度：98.0%      小鼠纖溶酶原激活劑抑制物-1(mouse PAI-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

N-Benzoyl-L-glutamic acid  6094-36-6  中文名：N-苯甲酰-L-谷氨酸  分子式：C12H13NO5  度：98.0%      小鼠血小板生長因子(mouse PDGF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

N-Benzoyl-leucine  17966-67-5  中文名：N-苯甲?；?/span>-亮氨酸  分子式：3  度：98.0%      小鼠血小板源生長因子-BB(mouse PDGF-BB)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

服務(wù)流程：

碩大利什曼原蟲探針法熒光定量PCR試劑盒說明書1、根據(jù)客戶提供的基因序列設(shè)計特異性引物和熒光探針（染料法只需設(shè)計引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄

3、實時熒光定量PCR

4、提供完整的實驗結(jié)果報告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴(kuò)增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）