實(shí)時(shí)熒光定量PCR：

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性極好，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。

外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性最好的定量方法，已得到全世界的公認(rèn)，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：勞森菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒廠家

英文名稱：Lawsonia spp.

貨號: GOY-M4162

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品及特點(diǎn):

是從土壤農(nóng)桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉(zhuǎn)基因植物研究中最為常用的一種篩選標(biāo)記基因，因此本公司根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據(jù) 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的

鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分，但不能檢測其他非 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個(gè)檢測過程（按一個(gè)樣品計(jì)）所需時(shí)間僅為 2.0 小時(shí)。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

操作步驟：

下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規(guī)PCR 檢測試劑盒 (一步法)，具體產(chǎn)品操作以說明書為準(zhǔn)。

第1步：樣本處理：

第2步：試劑制備：

第3步：PCR體系建立：

第4步：啟動PCR反應(yīng)

第5步：電泳結(jié)果分析

191bp為內(nèi)控對照條帶，表明PCR反應(yīng)正常。

當(dāng)樣本存在支原體污染時(shí)，由于內(nèi)控對照與支原體DNA存在競爭，內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內(nèi)控對照條帶會完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結(jié)果。

如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ê完幮詫φ障啾龋?，此時(shí)應(yīng)先進(jìn)行DNA抽提（推薦使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當(dāng)于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設(shè)置qPCR反應(yīng)（20 μL體系，在樣品制備室進(jìn)行）

10. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對照，6個(gè)用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復(fù)，則反應(yīng)設(shè)置數(shù)量相應(yīng)增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

fPentoxyverine citrate  中文名：枸櫞酸噴托維林  分子式：C26H39NO10  度：98.0%  小鼠蛋白激酶elisa試劑盒   小鼠蛋白激酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠蛋白激酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠蛋白激酶試劑盒、小鼠蛋白激酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

Dioxopromethazine hydrochloride  中文名：鹽酸二氧丙嗪  分子式：C17H21ClN2O2S  度：99.0%  小鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(mouse HIF-1α)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Aspirin  中文名：阿司匹林  分子式：C9H8O4  度：99.0%  小鼠熱休克蛋白60(mouse Hsp-60)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Oxytetracycline hydrochloride  中文名：鹽酸土霉素  分子式：C22H25ClN2O9  度：98.0%  小鼠組胺(mouse HIS)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Flumequine  中文名：氟甲喹  分子式：C14H12FNO3  度：98.0%  小鼠肝生素(mouse HGF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白elisa試劑盒   小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白試劑盒、小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Bezafibrate  41859-67-0  中文名：苯扎貝特  分子式：C19H20ClNO4  度：98.0%   

小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白(LAT)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Bezafibrate  中文名：苯扎貝特  分子式：C19H20ClNO4 

小鼠Toll樣受體9(TLR-9/CD289)ELISAkit   ELISA.   96T/48T  Gatifloxacin Mesylate  中文名：甲磺酸加替沙星  分子式：C20H26FN3O7S 

小鼠Toll樣受體-2(mouse TLR-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     N-Demethylricinine  21642-98-8  中文名：  分子式：C7H6N2O2 

小鼠TH糖蛋白(THP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Betaxolol hydrochloride  63659-19-8  中文名：鹽酸倍他洛爾  分子式：C18H30ClNO3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：載脂蛋白   英文名稱：   Apolipoprotein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   AI  Odoroside H  18810-25-8  中文名：  分子式：C30H46O8 

勻漿制作或抽提   Homogenate production or exaction  Xanthorin  中文名：  分子式：C16H12O6  度：%

月桂酰基麥芽糖苷   1g  Zidovudine  中文名：齊多夫定  分子式：C10H13N5O4  度：98.0%

愈創(chuàng)木酚   50g  Zileuton  中文名：齊留通  分子式：C11H12N2O2S  度：98.0%

魚孕激素elisa試劑盒   魚孕激素試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   魚孕激素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：魚孕激素試劑盒、魚孕激素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Valdecoxib  中文名：帕瑞考昔  分子式：C16H14N2O3S

勞森菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒廠家Nefopam hydrochloride  23327-57-3  中文名：鹽酸奈福泮  分子式：C17H20ClNO  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    FMS樣酪酸激酶   英文名稱：   Fms-related tyrosine kinase-3   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   Flt3

Nebivolol hydrochloride  169293-50-9  中文名：鹽酸奈必洛爾  分子式：C22H26ClF2NO4  度：98.0%      小鼠Flt3配體   英文名稱：   Fms-related tyrosine kinase-3 Ligand   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   Flt3 Ligand

N-Demethylricinine  21642-98-8  中文名：  分子式：C7H6N2O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠纖維連接蛋白   英文名稱：    fibronecti   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   FN

n-Butyl-β-D-fructopyranoside  67884-27-9  中文名：  分子式：C10H20O6  度：%  關(guān)鍵詞：  中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫  小鼠纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

n-Butyl β-D-fructofuranoside  80971-60-4  中文名：正丁基-β-D-呋喃果糖苷  分子式：C10H20O6  度：97.0%  關(guān)鍵詞：    小鼠纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

服務(wù)流程：

勞森菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒廠家1、根據(jù)客戶提供的基因序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針（染料法只需設(shè)計(jì)引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄

3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR

4、提供完整的實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴(kuò)增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）